ICS 65.150 B 52 GB 中华人民共和国国家标准 GB/T 195282004 奥尼罗非鱼亲本保存技术规范 Technique standard in holding the parents of hybrid between nile tilapia and blue tilapia 2004-05-31发布 2004-10-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T19528—2004 前言 本标准的附录A、附录B和附录C为规范性附录。 本标准由中华人民共和国农业部提出。 本标准由全国水产标准化技术委员会淡水养殖分技术委员会归口。 本标准起草单位：中国水产科学研究院淡水渔业研究中心。 本标准主要起草人：吴婷婷、杨弘、李建林 GB/T19528—2004 奥尼罗非鱼亲本保存技术规范 1 范围 本标准规定了奥尼罗非鱼亲本一一奥利亚罗非鱼（Oreochromisaurea）和尼罗罗非鱼（Oreochromis niloticus)的来源、纯种鉴别、隔离饲养、提纯复壮和建档管理技术。 本标准适用于奥尼罗非鱼亲本的保存。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 NY/T5054无公害食品尼罗罗非鱼养殖技术规范 SC1027尼罗罗非鱼 SC1042奥利亚罗非鱼 SC/T1045奥利亚罗非鱼亲鱼 SC/T1046 奥尼罗非鱼制种技术要求 3亲本来源 3.1奥利亚罗非鱼来源按SC/T1045的规定执行。 3.2尼罗罗非鱼来源按NY/T5054的规定执行。 4亲本纯种鉴别 4.1形态学鉴别 奥利亚罗非鱼的外部形态特征应符合SC1042的规定；尼罗罗非鱼的外部形态特征应符合SC1027 的规定。 4.2细胞遗传学鉴别 奥利亚罗非鱼的染色体数与核型应符合SC1042的规定；尼罗罗非鱼的染色体数与核型应符合 SC1027的规定。 4.3生化遗传学鉴别 在血清酯酶的等电聚焦电泳图谱上，奥利亚罗非鱼具有一条等电点为pH4.69的特异性酶带，尼罗 罗非鱼具有一条等电点为pH4.63的特异性酶带。血清酯酶等电聚焦技术见附录A。 4.4分子遗传学鉴别 4.4.1酶切线粒体DNA标记技术 用限制性内切酶PvuIⅡI酶切在尼罗罗非鱼mtDNA上有3个或4个PvuⅡ位点，奥利亚罗非鱼 mtDNA上有5个PvuI位点。酶切线粒体DNA标记技术见附录B。 4.4.2随机扩增多态性DNA技术（简称RAPD技术） 应用RAPD技术筛选出四种引物可检测奥利亚罗非鱼或尼罗罗非鱼 引物OPZ06，奥利亚罗非鱼有一条900bp的片段，在尼罗罗非鱼中没有 引物OPZ10,尼罗罗非鱼有一条1500bp的片段，在奥利亚罗非鱼中没有。 引物OPZ12，尼罗罗非鱼有一条1700bp的片段，在奥利亚罗非鱼中没有。 1 GB/T19528—2004 引物OPZ19，尼罗罗非鱼有一条730bp的片段，在奥利亚罗非鱼中没有。 RAPD标记技术见附录C。 5隔离饲养 5.1养殖 奥利亚罗非鱼和尼罗罗非鱼的苗种、成鱼与越冬期的养殖均按NY/T5054的规定执行。 5.2隔离措施 5.2.1制定隔离保种制度，并严格执行，定期检查。 5.2.2纯种繁殖用鱼池和供生产奥尼杂交鱼用鱼池要严格隔离。 5.2.3奥利亚罗非鱼和尼罗罗非鱼分区专池饲养，各区建立独立的进、排水系统，进、排水口安置过滤 网，严防混杂。 5.2.4不同来源、不同家系，不同世代的奥利亚罗非鱼和尼罗罗非鱼要分池隔离饲养、越冬。 6提纯复壮 6.1选育方法 6.1.1第一次筛选是在苗种培育结束时进行生长优势的个体选择，选留群体数量≤总数的2/3。 6.1.2第二次筛选是鱼种培育到100g/尾左右的鱼种时，选留符合SC1042和SC1027的规定，表型 优良、生长快的个体。 6.1.4第四次筛选是在翌年春出越冬池时，严格按照SC1042、SC1027和SC/T1046的规定进行，并 放入产卵池繁殖。 6.2品种提纯 采用混合选择和家系选择相结合的方法。混合选择是从原品种繁殖的后代中，选出符合SC1042、 SC1027和SC/T1046的规定、表型优良的个体，建立5～6个家系，分池饲养，培育成亲鱼。对所建的 每个家系留1000尾（雌800尾，雄200尾）以上的优良个体，进行同代同血缘的同质选配，对后代进行 精心培育，然后在苗种，100g/尾鱼种时、人池越冬前、春季出池时四个阶段按选育目标进行去劣留优。 如此经四个世代筛选，最后选出2～3个优良的家系。 6.3复壮 6.3.2保留1000尾（雌800尾，雄200尾）以上的不同品种、不同家系、不同世代的亲本，以便保持各 自后代群体的杂合性，降低近交系数，防止品种退化。 6.3.3进行严格而持续的选择。 7建档管理 7.1建档 建档的原始资料一般为：引种来源、原名、原来性状、检疫、引进单位、时间、地点、数量、规格、成 活率。 7.2育种记录 育种的主要记录如下： 引进种的培育：鱼池面积、水源、水深、水质、放养量、投饵施肥、生长、病害防治及日常管理等。 一繁殖：配伍、催产、孵化、出苗情况等。 一苗种培育：品种、面积、水源、水深、水质、放养量、饲养管理、病害防治、选育、出池、销售等情况。 一一后备亲鱼培育：品种、面积、水源、水深、水质、放养量、饲养管理、病害防治、选育、出池、销售等 2 GB/T19528—2004 情况。 7.3选育记录 选育的主要记录为： a） 第一次筛选：鱼苗至鱼种时，选留数量、平均体重（群体平均体重量）、表型性状 第二次筛选：鱼种至100g体重时，选留数量、平均体重（群体平均体重量）、表型性状。 c) 第三次筛选：100g体重至越冬时，选留数量、平均体重（群体平均体重量）、表型性状 第四次筛选：越冬至翌年春出池时，选留数量、平均体重（群体平均体重量）、表型性状 (p 生产中及时、准确记录、定期汇总归档，并接受监督检查。 7.4、提纯复壮记录 提纯复壮的主要记录为：品种、来源、家系、世代、性状、育种（按7.2记录）、选育（按7.3记录）。 3