ICS 67.050 X 04 GB 中华人民共和国国家标准 GB/T207412006 畜禽肉中地塞米松残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 Method for the determination of dexamethasone residues in livestock and poultry muscles- LC-MS-MS method 2006-12-31发布 2007-03-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T 20741—2006 前 言 本标准的附录A和附录B为资料性附录。 本标准由中华人民共和国秦皇岛出人境检验检疫局提出。 本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局归口。 本标准起草单位：中华人民共和国秦皇岛出人境检验检疫局、山东农业大学。 本标准主要起草人：庞国芳、刘永明、曹彦忠、范春林、张进杰、李学民、吴艳萍、李金、连玉晶、林忠。 本标准系首次发布的国家标准 GB/T 20741—2006 畜禽肉中地塞米松残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 1范围 本标准规定了牛肉、猪肉、羊肉和鸡肉中地塞米松残留量的液相色谱-串联质谱测定方法。 本标准适用于牛肉、猪肉、羊肉和鸡肉中地塞米松残留量的测定。 本标准的方法检出限：0.2μg/kg。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T6379.1测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第1部分：总则与定义 (GB/T6379.1—2004,ISO5725-1:1994,IDT) GB/T6379.2测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测量方法重复 性与再现性的基本方法（GB/T6379.2—2004，ISO5725-2:1994，IDT） GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682—1992，neqISO3696：1987） 3原理 动物组织样品中加人内标甲基强的松龙（6-alpha-methylprednisolone），样品用乙酸乙酯提取，提取 液浓缩后，经过BOND-ELUTSi固相萃取柱净化，液相色谱-串联质谱仪测定，内标法定量。 4试剂和材料 水为GB/T6682规定的一级水。 4.1甲醇：色谱纯。 4.2乙腈：色谱纯。 4.3 乙酸乙酯：色谱纯。 4.4 甲酸：优级纯。 4.5正已烷：色谱纯。 4.6 丙酮：色谱纯。 4. 7 丙酮-正已烷溶液I：丙酮+正已烷（2十8）。 4.8 丙酮-正已烷溶液Ⅱ：丙酮+正已烷（4十6）。 4.9无水硫酸钠：分析纯。在650℃马弗炉中灼烧6h，贮存于干燥器中。 4. 10 氢氧化钠：优级纯。 4.11 氢氧化钠溶液：0.3mol/L。称取12g氢氧化钠，用水溶解，定容至1000mL。 4. 12 地塞米松和甲基强的松龙标准物质：纯度≥99%。 4. 13 3地塞米松标准储备溶液：1.0mg/mL。准确称取100mg地塞米松标准物质，用甲醇溶解，定容 至100mL。配成的标准储备液可在温度低于一20℃冰箱中保存三个月。 4.14甲基强的松龙标准储备溶液：1.0mg/mL。准确称取100mg甲基强的松龙标准物质，用甲醇溶 GB/T 20741—2006 解，定容至100mL。配成的标准储备液可在温度低于一20℃冰箱中保存三个月。 4.15地塞米松标准工作溶液：吸取适量的地塞米松标准储备溶液，用甲醇分别配成5ug/mL和 0.050μg/mL两种浓度的标准工作溶液。配成的标准工作溶液可在温度低于一20℃冰箱中保存一 个月。 成浓度分别为1.0ng/mL、2.0ng/mL、5.0ng/mL、50.0ng/mL的基质标准工作溶液。基质标准工作 溶液应现用现配。 4.17甲基强的松龙标准工作溶液：吸取适量的甲基强的松龙标准储备溶液，用甲醇分别配成5μg/mL 和0.5ug/mL两种浓度的标准工作溶液。配成的标准工作溶液可在温度低于一20℃冰箱中保存一 个月。 4.18BOND-ELUTSi固相萃取柱或相当者：500mg，3mL。使用前用2mL丙酮+正已烷（2十8）预 处理，保持柱体湿润。 4.19滤膜：0.20μm。 5仪器 5. 1 液相色谱-串联质谱仪：配有大气压化学电离源（APCI）。 5.2分析天平：感量0.1mg和0.01g。 5.3液体混匀器。 5.4固相萃取真空装置。 5.5均质器。 5.6振荡器。 5.7 具塞玻璃离心管：50mL。 5.8真空泵：真空度应达到80kPa。 5.9离心机。 5.10旋转蒸发器。 5.11氮气浓缩仪。 5.12样品管：10mL。 5.13梨形瓶：150mL。 5.14筒形漏斗。 6试样的制备与保存 6.1试样的制备 从全部样品中取出有代表性样品约1kg，充分搅碎，混匀，均分成两份，分别装人洁净容器内。密 6.2试样保存 将试样于一18℃冷冻保存。 7测定步骤 7.1提取 称取5g试样（精确到0.01g）置于50mL具塞玻璃离心管中，加入0.5μg/mL内标甲基强的松龙 （6-alpha-methylprednisolone）标准工作溶液20μL，加人10mL0.3mol/L氢氧化钠溶液，在液体混匀 器上混匀1min，加20mL乙酸乙酯，用均质器均质1min，在振荡器振荡20min，以3000r/min离心 5min，取上清液过盛有25g无水硫酸钠的筒形漏斗至梨形瓶中。再用20mL乙酸乙酯提取一次，过无 2 GB/T20741—2006 水硫酸钠筒形漏斗，合并上清液，用旋转蒸发器于45℃水浴上减压蒸发至近干，用1mL乙酸乙酯和 5mL正已烷溶解。 7.2净化 将提取液移至经预处理的BOND-ELUTSi固相萃取柱中，用2mL丙酮+正已烷（4+6)洗涤梨形 瓶和萃取柱，弃去全部流出液。在65kPa的负压下，减压抽干1min，用6mL丙酮十正已烷（4十6）以 ≤3mL/min流速洗脱，收集洗脱液于10mL样品管中，用氮气浓缩仪吹干，用1mL流动相溶解，过 0.20μm滤膜，供液相色谱-串联质谱仪测定。 7.3测定 7.3. 1 液相色谱条件 a) 色谱柱：AtlantisdCig3μm,150mmX2.1mm(内径）或相当者； b) 流动相：乙腈+0.1%甲酸水（50十50）； 流速：200μL/min； c) d) 柱温：30℃； e) 进样量：20μL。 7.3. 2 质谱条件 a) 离子源：大气压化学电离源（APCI)； b) 扫描方式：正离子扫描； c) 检测方式：多反应监测； d) 雾化电流：3.00μA； e) 气帘气压力：0.138MPa； f) 雾化气压力：0.276MPa； g) 辅助加热气压力：0.138MPa； h) 离子源温度：250℃； i) 定性离子对，定量离子对，去簇电压和碰撞能量见表1。 表1地塞米松和甲基强的松龙的质谱参数 名称 定性离子对(m/） 定量离子对（m/） 去簇电压/V 碰撞能量/V 393.2/373.2 21 14 地塞米松 393.2/373.2 393.2/355.2 21 17 375.2/161.2 16 26 375.2/161.2 甲基强的松龙 375.2/339.2 16 9 7.3.3液相色谱-串联质谱测定 在仪器最佳工作条件下，采用内标法进行定量测定，内标为甲基强的松龙，为减少基质的影响，定量 采用基质标准工作溶液进样，样品溶液中地塞米松的响应值应在仪器测定的线性范围内。地塞米松和 甲基强的松龙标准物质总离子流图参见图A.1。在上述色谱条件和质谱条件下，地塞米松和甲基强的 松龙参考保留时间见表2。 表2地塞米松和甲基强的松龙的参考保留时间 名称 保留时间/min 地塞米松 3.75 甲基强的松龙 3. 48 本方法的添加回收率数据参见附录B。