ICS 67.050 X 04 GB 中华人民共和国国家标准 GB/T 20745—2006 畜禽肉中癸氧喹酯残留量的测定 液相色谱-荧光检测法 Method for the determination of decoquinate residues in livestork and poultry muscles- LC-fluorescence detection method 2006-12-31发布 2007-03-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T 20745—2006 前 言 本标准的附录A和附录B为资料性附录。 本标准由中华人民共和国秦皇岛出人境检验检疫局提出。 本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局归口。 本标准起草单位：中华人民共和国秦皇岛出人境检验检疫局。 本标准主要起草人：庞国芳、李学民、张进杰、曹彦忠、刘晓茂、范春林、刘永明、赵为 本标准系首次发布的国家标准。 GB/T20745—2006 畜禽肉中葵氧喹酯残留量的测定 液相色谱-荧光检测法 1范围 本标准规定了牛，羊、猪和鸡肉中癸氧酯残留量的液相色谱测定方法。 本标准适用于牛、羊、猪和鸡肉中癸氧喹酯残留量的测定。 本标准癸氧喹酯的方法检出限为0.2mg/kg。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T6379.1测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第1部分：总则与定义 (GB/T6379.1—2004,ISO5725-1:1994,IDT) GB/T6379.2测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测量方法重复 性与再现性的基本方法（GB/T6379.2—2004.ISO5725-2：1994，IDT） GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682—1992，neqISO3696：1987） 3原理 试样中癸氧喹酯残留，用甲醇十三氯甲烷溶液提取，提取液经过浓缩后，通过反相液相色谱柱分离， 癸氧喹酯用配有荧光检测器的液相色谱仪测定，外标法定量。 4试剂和材料 除另有说明外，所用试剂均为优级纯，水为GB/T6682规定的一级水。 4.1甲醇：色谱纯。 4.2乙腈：色谱纯。 4.3三氯甲烷：色谱纯。 4.4 提取液：甲醇十三氯甲烷（4十1)。量取80mL甲醇（4.1)与20mL三氯甲烷（4.3）混合。 4.5偏磷酸。 4.6 偏磷酸溶液：5%。称取5.0g偏磷酸（4.5），用水溶解，定容至100mL。 4.7 硝酸钙[Ca(NO.，·4H,O]。 4.8 硝酸钙溶液：0.20mol/L。称取10.0g硝酸钙（4.7），用水溶解，定容至200mL。 4.9癸氧喹酯标准物质：纯度≥99%。 4.10 癸氧喹酯标准储备溶液：准确称取适量的氧喹酯标准物质（4.9），用提取液（4.4）制成浓度为 50μg/mL的标准储备溶液。 4.110.2μm滤膜。 5仪器 5.1液相色谱仪：配有荧光检测器。 GB/T20745—2006 分析天平：感量0.1mg和0.01g。 5.2 5.3均质器。 5.4离心机：带有50mL离心管。 5.5氮气浓缩仪。 5.6微量注射器：100μL。 5.7刻度样品管：10mL，精度为0.1mL。 6测定步骤 6.1 试样溶液和标准工作溶液的制备 （4.4），均质2min，以4000r/min离心5min，把上层提取液移至另一个50mL离心管中，再用15mL 提取液重复提取一次，合并两次提取液，加入15mL偏磷酸溶液（4.6）和4mL三氯甲烷（4.3），混匀，以 4000r/min离心5min，弃掉上层水溶液。向四个空白样品提取液中分别加入癸氧喹酯标准储备溶液 水浴中浓缩至最小体积，用流动相定容1mL，涡旋溶解，然后，在一20℃保持10min凝固脂肪，以 4000r/min离心5min，把上层样液通过0.2μm滤膜（4.11)，同时得到浓度分别为1.0μg/mL、 2.5μug/mL、5.0μg/mL，10.0μg/mL标准工作溶液，供液相色谱仪测定。 6.2测定 6.2. 1 液相色谱条件 a) 色谱柱：InertsilC5μm150mm×4.6mm（内径）或相当者； 流动相：硝酸钙溶液（4.8）十乙腈（4.2）+甲醇（20+3+77）； 柱温：50℃； c) d) 流速：1.0mL/min; 检测波长：激发波长326nm，发射波长384nm； e） f) 进样量：50μL。 6.2.2液相色谱测定 用癸氧喹酯标准工作溶液（6.1)分别进样，以标准工作溶液浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制 标准工作曲线。用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中癸氧喹酯的响应值均应在仪器测定的线 性范围内。在上述色谱条件下，癸氧喹酯的参考保留时间为4.094min。 癸氧喹酯标准物质的色谱图参见图A.1。 本方法的添加回收率数据参见附录B。 6.3平行试验 按上述步骤，对同一试样进行平行试验测定。 6.4空白试验 除不称取试样外，均按上述分析步骤进行 7结果计算 试样中癸氧喹酯残留量利用数据处理系统计算或按式（1)计算： V1000 X-cX .(1) 式中： X—试样中被测组分残留量，单位为毫克每千克（mg/kg）； 从标准工作曲线得到的试样溶液中被测组分的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）； 2 GB/T 20745—2006 V一试样溶液定容体积，单位为毫升（mL）； m一一最终试样溶液所代表的试样质量，单位为克（g）。 8精密度 本标准的精密度数据是按照GB/T6379.1和GB/T6379.2的规定确定的，其重复性和再现性的 值以95%的可信度来计算。 8.1重复性 在重复性试验条件下，试样中癸氧喹酯含量在0.2mg/kg~2.0mg/kg范围，获得的两次独立测试 结果的绝对差值不超过重复性限r，本标准的重复性限按式（2)计算： lgr = 0. 766 8lgm-1. 290 9 ....( 2) 式中： 一两次测定值的平均值。 如果两次测定值的差值超过重复性限r，则应舍弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定。 8.2再现性 在再现性试验条件下，试样中癸氧喹酯含量在0.2mg/kg~2.0mg/kg范围，获得的两次独立测试 结果的绝对差值不超过再现性限R，本标准再现性限按式（3)计算： R= 0.114 6m+0.010 2 ...(3) 式中： m—-两次测定值的平均值。