ICS 67.050 X 04 GB 中华人民共和国国家标准 GB/T 20748—2006 牛肝和牛肉中阿维菌素类药物 残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 Method for the determination of avermectins residues in bovine liver and muscles- LC-MS-MS method 2006-12-31发布 2007-03-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T 20748—2006 前言 本标准的附录A和附录B为资料性附录。 本标准由中华人民共和国秦皇岛出人境检验检疫局提出。 本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局归口。 本标准起草单位：中华人民共和国秦皇岛出人境检验检疫局、中华人民共和国广东出人境检验检 疫局。 本标准主要起草人：庞国芳、林峰、林海丹、吴映璇、谢守新。 本标准系首次发布的国家标准。 1 GB/T20748—2006 牛肝和牛肉中阿维菌素类药物 残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 1范围 本标准规定了牛肝和牛肉中伊维菌素（ivermectin）、阿维菌素（abamectin）、多拉菌素（doramectin） 和爱普瑞菌素（eprinomectin）残留量的液相色谱-串联质谱测定方法。 本标准适用于牛肝和牛肉中伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素和爱普瑞菌素残留量的测定。 本标准的方法检出限：伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素和爱普瑞菌素均为4μg/kg 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T6379.1测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第1部分：总则与定义 (GB/T6379.1—2004,ISO5725-1:1994,IDT) GB/T6379.2测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测量方法重复 性与再现性的基本方法（GB/T6379.2一2004，ISO5725-2：1994，IDT） GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682—1992，neqISO3696：1987） 3原理 检测。 4试剂和材料 除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。 4.1乙：色谱纯。 4.2 冰乙酸。 4.3中性氧化铝：Brockmann活度1级或相当者 4.4无水硫酸钠：经650℃灼烧4h，置于干燥器中备用 4.5中性氧化铝净化柱：取一空的固相萃取柱管，下部填入少量脱脂棉，装人2g中性氧化铝（4.3），上 部再填充4g无水硫酸钠，使用前装填。 4.6三乙胺。 4.7伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素、爱普瑞菌素标准物质：纯度≥99%。 4.8标准储备溶液：100ug/mL。准确称取适量的伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素和爱普瑞菌素标准物 质，用乙睛分别配制成100μg/mL的标准储备溶液，一18℃贮存，爱普瑞菌素标准储备溶液可使用3个 月，伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素储备溶液可使用1年。 4.9混合标准储备溶液：0.5μg/mL。准确吸取0.5mL伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素和爱普瑞菌素 标准储备溶液至100mL容量瓶中，以乙稀释并定容。一18℃贮存，可使用3个月 1 GB/T207482006 4.10基质混合标准工作溶液：根据需要，吸取不同体积的混合标准储备溶液（4.9），用空白样品提取液 配成不同浓度的基质混合标准工作溶液。当天配制。 4.11滤膜：0.45μm。 5仪器和设备 5.1液相色谱-串联四极杆质谱仪：配有大气压化学电离源（APCI)。 5.2分析天平：感量0.1mg和0.01g。 5.33 组织捣碎机。 5.4 匀质机。 5.5离心机：转速大于4000r/min。 5.6超声波。 5.7 液体混匀器 5.8 KD浓缩瓶：25mL。 5.9 固相萃取装置。 5.10 旋转蒸发器。 6试样的制备与保存 6.1试样的制备 取样品约500g用组织捣碎机捣碎，装入洁净容器作为试样，密封，并标明标记 6.2试样的保存 将试样于-18℃冰箱中保存。 7测定步骤 7.1提取 准确称取2g试样，精确至0.01g。置于50mL离心管中，加入8mL乙睛，以8000r/min均质 20，4000r/min离心5min，上清液转移至50mL比色管中，另取一50mL离心管加人8mL乙睛，洗 涤匀质刀头10s，洗涤液移人前一离心管中，用玻棒捣碎离心管中的沉淀，在液体混匀器上涡旋30S， 4000r/min离心5min，上清液合并至50mL比色管，离心管中的沉淀再加人5mL乙睛，用玻棒捣碎 离心管中的沉淀，于液体混匀器上涡旋30s，4000r/min离心5min，上清液合并至50mL比色管，待净 化。 7.2净化 将中性氧化铝净化柱（4.5)安置在固相萃取装置上，将上清液（7.1)小心倒人中性氧化铝净化柱中， 控制流速在1mL/min～2mL/min，待样液完全流出后，再向净化柱中加入2mL乙睛淋洗净化柱，收 10min，过0.45μm滤膜（4.11)后，供液相色谱-串联质谱测定。 称取2g阴性样品，按7.1和7.2步骤制备空白样品提取液，用于配制系列基质混合标准工作 溶液。 7.3测定 7.3.1液相色谱条件 a）色谱柱：IntersilC8-3色谱柱，5μm，150mm×4.6mm（内径）或相当者； b) 柱温：40℃； c) 流动相：甲醇十水=9十1，每1L该溶液加入1mL三乙胺； (p 流速：1.0mL/min; 2 GB/T 20748—2006 e) 进样量：50μL。 7. 3. 2 质谱条件 a) 离子源：大气压化学电离源； b) 扫描方式：负离子扫描； 检测方式：多反应监测（MRM）； c) (p 雾化气、气帘气、辅助加热气、碰撞气均为高纯氮气及其他合适气体；使用前应调节各气体流 量以使质谱灵敏度达到检测要求： e） 喷雾电压、去簇电压、碰撞能等电压值应优化至最佳灵敏度； f) 定性离子对、定量离子对、去簇电压和碰撞气能量见表1。 表1P 四种阿维菌素类药物的质谱参数 定性离子对 定量离子对 采集时间 去簇电压 碰撞气能量 被测物名称 (m/) (m/2) /ms /V 873.7/567.2 28 伊维菌素 873.7/567.2 200 44 873.7/837.5 -28 871.7/565.2 -36 阿维菌素 871.7/565.2 200 47 871.7/853.5 -31 897.6/591.2 -38 多拉菌素 897.6/591.2 200 -44 897.6/879.4 -28 912.5/876.6 -23 爱普瑞菌素 912.5/876.6 200 47 912.5/565.3 38 7.3.3液相色谱-串联质谱测定 7.3.3.1定性测定 每种被测组分选择1个母离子，2个以上子离子，在相同试验条件下，样品中待测物质的保留时间 与标准溶液中对应的保留时间偏差在土2.5%之内：且样品中各组分定性离子的相对丰度与浓度接近的 标准溶液中对应的定性离子的相对丰度进行比较，偏差不超过表2规定的范围，则可判定为样品中存在 对应的待测物。 表2定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差 % 相对离子丰度 >50 >20~50 >10~20 ≤10 允许的最大偏差 ±20 ±25 ±30 ±50 7.3.3.2定量测定 在仪器最佳工作条件下，对混合标准工作溶液进样（4.10），以峰面积为纵坐标，混合标准溶液浓度 为横坐标绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中待测物的响应值均应在仪器 测定的线性范围内。外标法定量。四种阿维菌素的标准物质的多反应监测（MRM)色谱图参见图A.1。 四种阿维菌素的添加浓度及其平均回收率的试验数据参见表B.1。 7.4平行试验 按以上步骤，对同一试样进行平行试验测定。 7.5回收率试验 阴性样品中添加标准溶液，按7.1～7.2操作，测定后计算样品添加的回收率。 3