ICS 67.050 X 04 GB 中华人民共和国国家标准 GB/T207542006 畜禽肉中保泰松残留量的测定 液相色谱-紫外检测法 Method for the determination of phenylbutazone in livestock and poultry muscles- LC-UV detection method 2006-12-31发布 2007-03-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T 20754—2006 前言 本标准的附录A和附录B为资料性附录。 本标准由中华人民共和国秦皇岛出人境检验检疫局提出。 本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局归口。 本标准起草单位：中华人民共和国秦皇岛出人境检验检疫局。 本标准主要起草人：庞国芳、王飞、曹彦忠、贾光群、李学民、张进杰、范春林、刘永明、石玉秋。 本标准系首次发布的国家标准。 GB/T20754—2006 畜禽肉中保泰松残留量的测定 液相色谱-紫外检测法 1范围 本标准规定了牛肉、猪肉、羊肉和鸡肉中保泰松残留量的液相色谱测定方法。 本标准适用于牛肉、猪肉、羊肉和鸡肉中保泰松残留量的测定。 本标准的方法检出限：5.0μg/kg。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T6379.1测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第1部分：总则与定义 (GB/T6379.1—2004,ISO5725-1:1994,IDT) GB/T6379.2测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测量方法重复 性与再现性的基本方法（GB/T6379.2—2004ISO5725-2：1994，IDT） GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682—1992，neqISO3696：1987) 3原理 畜禽肉中保泰松残留用甲醇十二硫苏糖醇的乙酸乙酯溶液提取，提取液浓缩后，用甲醇十氨水十二 氯甲烷十二硫苏糖醇的乙酸乙酯溶液溶解，弗罗里土固相萃取柱净化，用冰乙酸十甲醇十二氯甲烷十乙 醚混合溶液洗脱并蒸至近干，残渣用流动相溶解定容，样品溶液供液相色谱-紫外检测器测定，外标法 定量。 4试剂和材料 除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。 4.1甲醇：色谱纯。 4.2冰乙酸。 4.3乙腈：色谱纯。 4.4乙酸铵。 4. 5 氢氧化铵。 4.6 乙醚。 4. 7 二硫苏糖醇：纯度≥99%。 4.8 乙酸乙酯：色谱纯。 4.9二氯甲烷：色谱纯。 4. 10 ）乙酸铵溶液：0.05mol/L。称取1.95g乙酸铵（4.4），用水溶解并定容于500mL容量瓶中。 4. 11 流动相：0.05mol/L乙酸铵溶液（4.10）+甲醇（4.1）+乙（4.3）（50+37+13）。 4.12溶液A：0.25mg/mL。称取0.125g二硫苏糖醇（4.7），用乙酸乙酯（4.8）溶解并定容至500mL 容量瓶中。 1 GB/T 20754—2006 4.13溶液B.甲醇十溶液A（4.12)（1十7）。用前制备。 4.14溶液C:甲醇十氢氧化铵（4.5）十二氯甲烷（4.9）十溶液A（1十1+70+70）。用前制备。 4.15溶液D：吸取2.0mL冰乙酸（4.2）和4.0mL甲醇于100mL容量瓶中，用二氯甲烷定容至刻度 后，与等体积乙醚混合。用前制备。 4.16保泰松标准物质：纯度≥95%。 4.17保泰松标准储备溶液：50.0μg/mL。准确称取5.0mg保泰松标准物质（4.16）于100mL容量 瓶中，用80mL甲醇溶解，加人5.0mL溶液A，用甲醇定容至刻度，混匀。4℃保存。 4.18中间浓度保泰松标准溶液：2.0μg/mL。吸取0.4mL保泰松标准储备溶液（4.17）于10mL容 量瓶中，用流动相定容至刻度。4℃保存。 4.19保泰松标准工作溶液：分别吸取2.5μL、5.0μL、12.5μL、25.0μL、50.0μL中间浓度保泰松标 准溶液（4.18），用流动相定容至1.0mL，配成5.0ng/mL，10.0ng/ml、25.0ng/mL、50.0ng/mL 100.0ng/mL浓度系列保泰松标准工作溶液。在4℃保存，可使用一周。 4.20弗罗里土固相萃取柱或相当者：2g，12mL。用前用5mL溶液C(4.14)处理。保持柱体湿润。 4.21滤膜：0.2μm。 5仪器 5. 1 液相色谱仪：配有紫外检测器。 5.2天平：感量0.01g,0.0001g。 5.3氮气浓缩仪。 5.4 离心管：50mL，具塞聚丙烯离心管。 5.5 固相萃取装置。 5.6均质器。 5.7冷冻离心机。 6试样制备与保存 6.1试样的制备 从全部样品中取出有代表性样品约1kg，充分搅碎，混匀，均分成两份，分别装入洁净容器内。密 封后作为试样，标明标记。在抽样和制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的 变化。 6.2试样的保存 7测定步骤 7.1提取 称取2g试样，精确至0.01g，置于50mL离心管（5.4)中。加人8mL溶液B(4.13)，于振荡器上 剧烈振荡10min，在5℃以4000r/min离心5min后，取上清液于另一离心管中；重复前述步骤，将残 渣再提取两次。合并三次提取液，用氮气浓缩仪于55℃水浴中吹至近干，待净化 7.2净化 用5mL溶液C（4.14）分两次溶解残渣，分别倒人弗罗里土固相萃取柱（4.20）中，使样液以 <1.0mL/min的流速通过弗罗里土固相萃取柱，待样液全部流出后，再用1mL溶液C（4.14）洗柱，弃 去全部流出液。最后用15mL溶液D（4.15）洗脱，洗脱液收集于30mL锥形试管中，用氮气浓缩仪于 55℃水浴中吹至近干，残液用1.0mL流动相溶解、定容。过0.2m滤膜（4.21）后，供液相色谱仪 测定。 2 GB/T20754—2006 7.3色谱测定 7. 3. 1 液相色谱条件 a) 色谱柱：MightysilCis，3μm，150mmX4.6mm或相当者； b) 流动相：0.05mol/L乙酸铵溶液+甲醇+乙腈（50+37+13）； c) 流速：0.8mL/min; 柱温：40℃； (p 进样量：40μL； e) 波长：270nm。 f) 7.3.2液相色谱测定 在仪器最佳工作条件下，以保泰松标准工作溶液（4.19）浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标 准工作曲线。用标准工作曲线对样品进行定量。使样品溶液中保泰松的响应值在仪器测定的线性范围 内。在上述色谱条件下，保泰松的参考保留时间为8.1min，保泰松标准溶液色谱图见图A.1。 7.4平行试验 按以上步骤，对同一试样进行平行试验测定。 7.5空白试验 除不称取样品外，均按上述步骤进行。 8结果计算 试样中保泰松残留量利用数据处理系统计算或按式（1)计算： .(1) 1000 式中： X一一试样中被测组分残留量，单位为毫克每千克（mg/kg）； 从标准工作曲线得到的被测组分溶液浓度，单位为微克每毫升（ug/mL）； V一试样溶液定容体积，单位为毫升（mL)； m——试样溶液所代表试样的质量，单位为克（g）。 计算结果应扣除空白值。 9精密度 本标准的精密度数据是按照GB/T6379.1和GB/T6379.2的规定确定的，其重复性和再现性的 值以95%的可信度来计算。 9.1重复性 在重复性实验的条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限，畜禽肉中保泰松 含量范围及重复性方程见表1。 表1含量范围及重复性和再现性方程 药物名称 含量范围/（μg/kg） 重复性限r 再现性限R 保泰松 5.0~150.0 lgr=0.7649lgm-0.828 5 lgR=0.7120lgm-0.7601 注：m为两次测定值的算术平均值。 如果差值超过重复性限r，应舍弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定。 9.2再现性 在再现性实验的条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过再现性限R，畜禽肉中保泰松 的含量范围及再现性方程见表1。