ICS 67.050 X 04 GB 中华人民共和国国家标准 GB/T207592006 畜禽肉中十六种磺胺类药物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 Method for the determination of sixteen sulfonamide residues in livestock and poultry muscles- LC-MS-MS method 2006-12-31发布 2007-03-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T20759—2006 前言 本标准的附录A和附录B为资料性附录。 本标准由中华人民共和国秦皇岛出人境检验检疫局提出。 本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局归口。 本标准起草单位：中华人民共和国秦皇岛出人境检验检疫局。 本标准主要起草人：庞国芳、曹彦忠、贾光群、张进杰、范春林、李学民、刘永明、石玉秋 本标准系首次发布的国家标准 GB/T20759—2006 畜禽肉中十六种磺胺类药物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 1范围 本标准规定了牛肉、羊肉、猪肉、鸡肉和兔肉中干六种磺胺类药物残留量液相色谱-串联质谱测定 方法。 本标准适用于牛肉、羊肉、猪肉、鸡肉和兔肉中干六种磺胺类药物残留量的测定。 本标准的方法检出限：磺胺甲噻二唑为2.5ug/kg，磺胺醋酰、磺胺嘧啶、磺胺吡啶、磺胺二甲异嗯 唑、磺胺甲基嘧啶、磺胺氯哒嗪、磺胺-6-甲氧嘧啶、磺胺邻二甲氧嘧啶、磺胺甲基异嗯唑为5.0μg/kg，磺 胺噻唑，磺胺甲氧哒嗪、磺胺间二甲氧嘧啶为10.0μg/kg，磺胺对甲氧嘧啶、磺胺二甲嘧啶为20.0μg/kg， 磺胺苯吡唑为40.0μg/kg 2g规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T6379.1测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第1部分：总则与定义 (GB/T6379.1—2004,ISO5725-1:1994,IDT) GB/T6379.2测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测量方法重复 性与再现性的基本方法（GB/T6379.2—2004，ISO5725-2:1994，IDT） GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682—1992，neqISO3696：1987) 3原理 畜禽肉中磺胺类药物残留用乙睛提取，离心后，上清液用旋转蒸发器浓缩近干，残渣用流动相溶解， 并用正已烷脱脂后，样品溶液供液相色谱-串联质谱仪测定，外标法定量。 4试剂和材料 除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。 4.1乙腈：色谱纯。 4.2异丙醇。 4.3正已烷。 4.4乙酸铵。 4.5无水硫酸钠：经650℃灼烧4h，置于干燥器中备用 4.6流动相：乙睛+0.01mol/L乙酸铵溶液（12+88）。 4.7磺胺醋酰、磺胺甲噻二唑、磺胺二甲异唑、磺胺氯哒嗪、磺胺嘧啶、磺胺甲基异嗯唑、磺胺噻唑、磺 胺-6-甲氧嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺邻二甲氧嘧啶、磺胺吡啶、磺胺对甲氧嘧、磺胺甲氧哒嗪、磺胺二 甲嘧啶、磺胺苯吡唑、磺胺间二甲氧啶标准物质：纯度≥99% 4.8十六种磺胺标准储备溶液：0.1mg/mL。准确称取适量的每种磺胺标准物质，用甲醇配成 0.1mg/mL的标准储备溶液，该溶液在4℃保存，可使用二个月。 1 GB/T 20759—2006 4.9基质混合标准工作溶液：根据每种磺胺的灵敏度和仪器线性范围用空白样品提取液配成不同浓度 （ng/mL）的基质混合标准工作溶液，基质混合标准工作溶液在4℃保存，可使用一周。 4.10滤膜：0.2μm。 5仪器 5.1液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源。 5.2匀质器。 5.3旋转蒸发器。 5.4、液体混匀器 5.5离心机。 5.6分析天平：感量0.1mg，0.01g。 5.7移液器:1mL,2mL。 5.8鸡心瓶:100mL。 5.9 样品瓶：2mL，带聚四氟乙烯旋盖。 6试样的制备与保存 6.1试样的制备 从全部样品中取出有代表性样品约1kg，充分搅碎，混匀，均分成两份，分别装入洁净容器内。密 封作为试样，标明标记。在抽样和制样的操作过程中，应防正样品受到污染或发生残留物含量的变化 6.2试样保存 将试样于一18℃冷冻保存。 7测定步骤 7.1样品制备 称取5g试样，精确至0.01g，置于50mL离心管中，加人20g无水硫酸钠（4.5）和20mL乙睛 （4.1），均质2min，以3000r/min离心3min。上清液倒人100mL鸡心瓶中，残渣再加人20mL乙睛， 重复上述操作一次。合并提取液，向鸡心瓶中加入10mL异丙醇（4.2），用旋转蒸发器（5.3）于50℃水 浴蒸干，准确加入1mL流动相（4.6）和1mL正已烷（4.3）溶解残渣。转移至5mL离心管中，涡旋 1min，以3000r/min离心3min，吸取上层正已烷弃去，再加入1mL正已烷，重复上述步骤，直至下层 水相变成透明液体。按上述操作步骤制备样品空白提取液。取下层清液，过0.2um滤膜（4.10）后，用 液相色谱-串联质谱仪测定。 7.2色谱测定 7.2.1液相色谱条件 a) 色谱柱：Lichrospher100RP-18,5μm，250mmX4.6mm（内径)或相当者； b) 流动相：乙+0.01mol/L乙酸铵溶液（12+88）； c) 流速：0.8mL/min； d) 柱温：35℃； 进样量：40μL； e) 分流比：1：3。 7.2.2 质谱条件 a) 离子源：电喷雾离子源； b) 扫描方式：正离子扫描； c） 检测方式：多反应监测； 2 GB/T20759—2006 d) 电喷雾电压：5500V； e) 雾化气压力：0.076MPa； f) 气帘气压力：0.069MPa； 辅助气流速：6L/min； g) h) 离子源温度：350℃； i) 定性离子对、定量离子对、碰撞气能量和去簇电压见表1。 表1十六种磺胺的定性离子对、定量离子对、碰撞气能量和去簇电压 定性离子对 定量离子对 碰撞气能量/ 去簇电压/ 中文名称 英文名称 V (m/z) (m/z) V 215/156 18 40 磺胺醋酰 sulfacetamide 215/156 215/108 28 45 271/156 20 50 磺胺甲噻二唑 sulfamethizole 271/156 271/107 32 50 268/156 20 45 磺胺二甲异唑 sulfisoxazole 268/156 268/113 23 45 285/156 23 50 磺胺氯哒嗪 sulfachloropyridazine 285/156 285/108 35 50 251/156 23 磺胺嘧啶 sulfadiazine 251/156 251/185 27 50 254/156 23 50 磺胺甲基异曬唑 sulfamethoxazole 254/156 254/147 22 45 256/156 22 99 磺胺噻唑 sulfathiazole 256/156 256/107 32 47 281/156 25 65 磺胺-6-甲氧嘧啶 sulfamonomethoxine 281/156 281/215 25 50 265/156 25 50 磺胺甲基嘧啶 sulfamerazine 265/156 265/172 24 60 311/156 31 70 磺胺邻二甲氧嘧啶 sulfadoxin 311/156 311/108 35 55 250/156 25 50 磺胺吡啶 sulfapyridine 250/156 250/184 25 60 281/156 25 65 sulfameter 磺胺对甲氧嘧啶 281/156 281/215 25 50 281/156 25 65 磺胺甲氧哒嗪 sulfamethoxypyridazine 281/156 281/215 25 50 279/156 22 55 磺胺二甲嘧啶 sulfamethazine 279/156 279/204 20 60 315/156 32 55 磺胺苯吡唑 sulfaphenazole 315/156 315/160 35 55 311/156 31 70 磺胺间二甲氧嘧啶 sulfadimethoxine 311/156 311/218 27 70 3