ICS 67.050 X 04 GB 中华人民共和国国家标准 GB/T20762—2006 畜禽肉中林可霉素、竹桃霉素、红霉素、 替米考星、泰乐菌素、克林霉素、螺旋霉素、 吉它霉素、交沙霉素残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 Method for the determination of lincomycin, oleandomycin, erythromycin, tilmicosin, tylosin, clindamycin, spiramycin, kitasamycin and josamycin residues in livestock and poultry muscles- LC-MS-MS method 2006-12-31发布 2007-03-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T20762—2006 前言 本标准的附录A和附录B为资料性附录。 本标准由中华人民共和国秦皇岛出人境检验检疫局提出。 本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局归口。 本标准起草单位：中华人民共和国秦皇岛出人境检验检疫局、山东农业大学。 本标准主要起草人：庞国芳、王飞、曹彦忠、贾光群、连玉晶、张进杰、李学民、范春林、刘永明、 石玉秋。 本标准系首次发布的国家标准。 1 GB/T20762—2006 畜禽肉中林可霉素、竹桃霉素、红霉素、 替米考星、泰乐菌素、克林霉素、螺旋霉素、 吉它霉素、交沙霉素残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 1范围 本标准规定了牛肉、猪肉、羊肉和鸡肉中林可霉素、竹桃霉素、红霉素、替米考星、乐菌素、克林霉 素、螺旋霉素、吉它霉素和交沙霉素残留量的液相色谱-串联质谱测定方法。 本标准适用于牛肉、猪肉、羊肉和鸡肉中林可霉素、竹桃霉素、红霉素、替米考星、泰乐菌素，克林霉 素、螺旋霉素、吉它霉素和交沙霉素残留量的测定。 本标准的方法检出限：林可霉素、竹桃霉素、红霉素、替米考星、泰乐菌素、克林霉素、螺旋霉素、吉它 霉素和交沙霉素均为 1.0 μg/kg。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T6379.1测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第1部分：总则与定义 (GB/T6379.1—2004,ISO5725-1:1994,IDT) GB/T6379.2测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测量方法重复 性与再现性的基本方法（GB/T6379.2—2004,ISO5725-2:1994,IDT) GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682—1992，neqISO3696：1987) 3原理 畜禽肉中九种大环内酯类抗生素（林可霉素、竹桃霉素、红霉素、替米考星、泰乐菌素、克林霉素、螺 解后，经OasisHLB固相萃取柱净化，甲醇洗脱，洗脱液浓缩定容后，供液相色谱-串联质谱法测定，内标 法定量。 SNG 4试剂和材料 除另有说明外，所用试剂均为优级纯，水为GB/T6682规定的一级水。 4.1甲醇：色谱纯。 4.2乙腈：色谱纯。 4.3正已烷：色谱纯。 4.4甲酸铵。 4.5磷酸氢二钠。 4.6氢氧化钠。 4.7 氯化钠。 GB/T20762—2006 4.82%氯化钠溶液：称取10.0g氯化钠（4.7），溶解于500mL水中。 4.9磷酸盐缓冲溶液：:0.1mol/L。6.0g磷酸氢二钠（4.5）溶解于450mL水中，用氢氧化钠（4.6）饱 和溶液调节pH=8,用水定容至500mL。使用前配制。 4.10甲醇十水溶液（2十3）：400mL甲醇（4.1）与600mL水混合。使用前配制 4.11甲酸铵溶液：0.1mmol/L。0.63g甲酸铵（4.4)加水溶解至1000mL。 4.12林可霉素、竹桃霉素、红霉素、替米考星、泰乐菌素、克林霉素、螺旋霉素、吉它霉素、交沙霉素和罗 红霉素（roxithromycin）标准物质：纯度≥95%。 4.13标准储备溶液：1.0mg/mL。准确称取每种标准物质（4.12）10.0mg分别放人10mL容量瓶 中，用甲醇溶解并定容至刻度，混匀。4℃保存。 4.14混合标准储备溶液：10.0μg/mL。分别吸取0.1mL各标准储备溶液（4.13）于10mL容量瓶 中，用甲醇定容至刻度。4℃保存，可使用一周。 4.15混合标准工作溶液：1.0μg/mL。吸取1.0mL混合标准储备溶液（4.14）于10mL容量瓶中，用 甲醇定容至刻度。用前配制。 4.16内标储备溶液：1.0mg/mL。准确称取10.0mg罗红霉素（4.12）于10mL容量瓶中，用甲醇溶 解定容至刻度，混匀。4℃保存。 4.17中间浓度内标溶液：10.0μg/mL。吸取0.1mL内标储备溶液（4.16）于10mL容量瓶中，用甲 醇定容至刻度。4℃保存。 4.18内标工作溶液：1.0μg/mL。吸取1.0mL中间浓度内标标准溶液（4.17）于10mL容量瓶中，用 甲醇定容至刻度。用前配制。 2.0ng/mL、5.0ng/mL、10.0ng/mL、50.0ng/mL浓度系列基质标准工作溶液。用前配制。 4.20OasisHLB固相萃取柱或相当者：500mg，6mL，或相当者。使用前，分别用10mL甲醇、10mL 水、5mL氯化钠溶液和5mL磷酸盐缓冲溶液（4.9）活化，保持柱体湿润。 4.21滤膜：0.2μm。 5仪器 5.1液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源。 5.2天平：感量0.01g,0.0001g。 5.3固相萃取装置。 5.4氮气浓缩仪。 5.5具塞聚丙烯离心管：50mL。 5.6 离心机。 6试样制备与保存 6.1试样的制备 从全部样品中取出有代表性样品约1kg，充分搅碎，混匀，均分成两份，分别装入洁净容器内。密 封后作为试样，标明标记。在抽样和制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的 变化。 6.2试样的保存 将试样于一18℃保存。 2 GB/T20762—2006 7测定步骤 7.1提取 称取5g试样，精确至0.01g，置于50mL离心管（5.5）中，加入10.0μL内标工作溶液（4.18）和 15.0mL乙（4.2），于振荡器上剧烈振荡10min。以4200r/min的转速离心5min，取上清液于另 离心管中，加入2.0g氯化钠（4.7）和10.0mL正已烷（4.3），于振荡器上剧烈振荡10min。以 4200r/min的转速离心10min，小心吸取中间乙层12.0mL于另一离心管中，用氮气浓缩仪于55℃ 水浴中吹至近干。 7.2净化 用7mL磷酸盐缓冲溶液（4.9）分两次溶解残液（7.1），使样液以小于1.0mL/min的流速通过 OasisHLB固相萃取柱（4.20）。样液全部流出后，再用10mL水和5mL甲醇十水溶液（4.10）洗柱，弃 去全部流出液，固相萃取柱用真空泵抽干1h。再用10mL甲醇（4.1)洗脱于15mL锥形试管中，用氮 气浓缩仪于55C水浴中吹至近干，准确加入1.0mL甲酸铵溶液（4.11）溶解残渣。用阴性样品，按上述 步骤制备空白样品提取液。过0.2um滤膜（4.21)后，供液相色谱-串联质谱仪测定。 7.3测定 7.3.1液相色谱条件 a) 色谱柱：IntersilCis3μm，150mmX2.1mm或相当者； b) 进样量：20μL； c) 流速：0.5mL/min； d) 柱温：20℃； e) 流动相：A：0.1mmol/L甲酸铵溶液，B：乙睛。梯度洗脱条件见表1。 表1梯度洗脱条件 时间/min 流速/(mL/min) 流动相A/（%） 流动相B/（%） 0. 0 0.50 95 5 1. 0 0.50 95 5 6.0 0.50 40 60 6. 1 0.50 5 95 10.0 0.50 5 95 10.1 0.50 95 5 20.0 0.50 95 5 7.3.2 质谱条件 a) 离子源：电喷雾离子源； b) 扫描方式：正离子扫描； 检测方式：多反应监测； c) d) 电喷雾电压：5500V； e) 雾化气压力：0.069MPa； f) 气帘气压力：0.69MPa； g) 辅助气流速：0.414MPa； h) 离子源温度：350℃； i) 碰撞室出口电压：2.0V； i) 定性离子对、定量离子对、碰撞气能量和去簇电压，见表2。