ICS 67.120 X 04 GB 中华人民共和国国家标准 GB/T 21324—2007 食用动物肌肉和肝脏中苯并咪唑类药物 残留量检测方法 Method for the determination of benzimidazoles residues in edible animal muscle and liver 2007-10-29发布 2008-04-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T21324—2007 前言 本标准的附录 A、附录 B、附录 C、附录D均为资料性附录 本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国广东出入境检验检疫局、中国检验检疫科学研究院 本标准主要起草人：林峰、林海丹、吴映璇、张美金、谢守新、彭涛、李晓娟、邵琳智、邱月明。 GB/T21324—2007 食用动物肌肉和肝脏中苯并咪唑类药物 残留量检测方法 1范围 方法和液相色谱检测方法 本标准适用于液相色谱法和液相色谱-串联质谱法测定鸡肉、牛肉、猪肉、鸡肝、牛肝、猪肝中奥芬达 唑、芬苯达唑及它们的代谢物奥芬达唑砜，阿苯达唑及其代谢物阿苯达唑-2-氨基砜、阿苯达唑亚砜和阿 苯达唑砜，甲苯咪唑及其代谢物氨基甲苯咪唑和羟基甲苯咪唑，氟苯咪唑及其代谢物2-氨基氟苯咪唑， 肉、猪肉、鸡肝、牛肝、猪肝中内氧苯咪唑残留量。适用于液相色谱法测定鸡肉、牛肉、猪肉、鸡肝、牛肝中 丙氧苯咪唑残留量。 2规范性引用文件 的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准， GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682—1992，neqISO3696：1987） 3方法提要 试样在碱性条件下以乙酸乙酯提取、离心、浓缩后残渣以乙腈-0.1mol/L盐酸溶解，正已烷脱脂 经固相萃取柱净化，液相色谱-串联质谱仪或高效液相色谱仪测定，外标峰面积法定量。 4试剂和材料 除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水， 4.1乙酸乙酯。 4. 2 正已烷。 4.3 甲醇：液相色谱级。 4.4乙腈：液相色谱级。 4.5 无水硫酸钠：经650℃灼烧4h，置于干燥器内备用。 4.6 BHT（2,6-二叔丁基对甲酚）。 4.7 盐酸。 4.8 氢氧化钾。 4. 9 25%氨水。 4.10甲酸：优级纯。 4.11乙酸胺。 4.121%BHT溶液：称取1.0gBHT，乙酸乙酯溶解并稀释至100mL，临用前配制。 4.13 0.1mol/L盐酸：量取浓盐酸8.3mL，加水稀释至1000mL。 4.140.005mol/L甲酸：准确吸取188μL甲酸，加水稀释至1000mL。 1 GB/T213242007 4.1550%氢氧化钾溶液：50g氢氧化钾溶解于100mL水中，冷却至室温后待用。 4.1610%氨乙睛溶液：量取10mL25%氨水，乙睛稀释至100mL，临用前配制。 4.170.025mol/L乙酸铵：1.93g乙酸铵溶解于1000mL水中。 4.18标准品：奥芬达唑（oxfendazole，CAS号53716-50-0）、芬苯达唑（fenbendazole，CAS号43210-67-9）、奥 芬达唑砜（oxfendazolesulfone，CAS号54029-20-8）、阿苯达唑（albendazole，CAS号54965218）、阿苯达 唑-2-氨基矾（albendazole-2-aminosulfone，CAS号80983-34-2）、阿苯达唑亚砜（albendazolesulfoxide， CAS号54029-12-8）、阿苯达唑砜（albendazolesulfone，CAS号75184-71-3）、甲苯咪唑（mebendazole， CAS号14798000）、氨基甲苯咪唑（mebendazole-amine，CAS号52329-60-9）、羟基甲苯咪唑 CAS号26097-80-3）、丙氧苯咪唑（oxibendazole，CAS号20559-55-1）标准品，含量均在98%以上，5-羟 基噻苯咪唑（thiabendazole-5-hydroxy，CAS号17450500）标准溶液浓度为10mg/L。 4.19标准储备液 准确称取奥芬达唑、芬苯达唑、奥芬达唑砜、阿苯达唑、阿苯达唑-2-氨基矾、阿苯达唑亚、阿苯达 唑矾、甲苯咪唑、氨基甲苯咪唑、羟基甲苯咪唑、氟苯咪唑、2-氨基氟苯咪唑、噻苯咪唑、噻苯咪唑酯、丙氧 苯咪唑标准品各10.0mg，分别用甲醇溶解并定容至100mL，配成标准储备溶液，浓度为100μg/mL。 4.20混合标准工作溶液 根据需要，用乙睛-水（2+8，体积比）将标准储备液（4.19）及5-羟基噻苯咪唑标准溶液配成供液相色谱 测定用的浓度为0、25.0、50.0、100、200、250ug/L的混合标准工作溶液，供液相色谱-串联质谱测定用的浓 度为0、2.00、5.00、10.0、20.0、40.0μg/L的混合标准工作溶液。混合标准工作溶液使用前配制。 4.21固相萃取柱：MCX固相萃取柱或相当者，150mg，6mL。使用前依次用5mL甲醇活化、5mL 0.1mol/L盐酸平衡。 4.22滤膜：0.20μm，0.45μm，有机相。 5仪器 5.2 液相色谱仪：配有紫外检测器或二极管阵列检测器。 5.3 均质器。 5.4 涡旋振荡器。 5. 5 5离心机：转速大于或等于4000r/min。 5.6 减压旋转蒸发仪。 5.7 超声波水浴。 5.8分析天平：感量0.1mg,0.01g。 6制样方法 制样操作过程中应防止样品受到污染或残留物含量发生变化。 从所取全部样品中取出有代表性样品可食部分约500g，用组织捣碎机充分捣碎均匀，装入洁净容 器中，密封，并标明标记，于一18℃以下冷冻存放。 7分析步骤 7.1提取 称取5g样品（准确至0.01g），于50mL离心管中，加入20mL乙酸乙酯、0.15mL50%氢氧化钾 (4.15）溶液和1mL1%BHT溶液（4.12)置超声波水浴中振荡5min，加人1g无水硫酸钠，均质器上 2 GB/T21324—2007 心管，加人20mL乙酸乙酯、0.15mL50%氢氧化钾溶液和1mL1%BHT溶液洗涤均质器刀头；用玻 棒捣碎离心管中的沉淀，加人上述洗涤均质器刀头的碱性乙酸乙酯溶液，在涡旋振荡器上振荡2min， 置超声波水浴中振荡5min，4000r/min离心5min，清液合并至100mL梨形瓶中，38℃减压旋转蒸发 至干。 7.2净化 上述残渣立即用1.5mL乙睛溶解，涡旋混匀，超声5min，加入1.5mL0.1mol/L盐酸，涡旋混 匀，转移到15mL离心管，加5mL正已烷洗涤梨形瓶，合并转移到离心管中，涡旋混匀，4000r/min离 心5min，弃上层正已烷层，加人3mL正已烷重复操作一次。 脱脂后的样液加入3mL0.1mol/L盐酸，涡旋混匀，注入已处理的MCX固相萃取柱（4.21），依次 用5mL0.1mol/L盐酸、5mL甲醇淋洗，15mL10%氨乙睛溶液（4.16）洗脱，洗脱液38℃减压旋转蒸 发至干，残渣加入0.5mL乙睛，置超声波水浴中振荡5min，加人1.5ml0.025mol/L乙酸铵（4.17）， 涡旋混匀，过0.45um滤膜，供液相色谱测定。当采用液相色谱-串联质谱法测定时，吸取100μL液相 色谱测定用样液，加入900L乙睛-水（2十8，体积比）混匀后过0.2um滤膜，供液相色谱-串联质谱 测定。 8测定 8.1液相色谱-串联质谱法 8.1.1液相色谱条件 8.1.1.1色谱柱：Cls柱，50mm×2.1mm（内径）,1.8μm，或性能相当者。 8.1.1.2流动相：乙睛+0.005mol/L甲酸，梯度洗脱；乙腈：15%~80%（4min内线性增加），80%保 持0.5min，80%~15%（0.01min内线性递减），15%保持3.5min。 8.1.1.3流速：0.35mL/min。 8.1.1.4柱温：60℃。 8.1.1.5进样量：5μL。 8.1.2质谱条件 8.1.2.1离子化模式：电喷雾电离正离子模式（ESI十）：质谱扫描方式：多反应监测（MRM）：分辨率： 单位分辨率；其他参考质谱条件见附录A。 量以使质谱灵敏度达到检测要求。 8.1.2.3喷雾电压、去集族电压、碰撞能等电压值应优化至最佳灵敏度 8.1.2.4各种苯并咪唑类药物和代谢物的定性离子对、定量离子对及相关质谱参数参见附录A。 8.1.3液相色谱-串联质谱测定 8.1.3.1定性测定 每种被测物质选择1个母离子，2个以上子离子，在相同实验条件下，样品中待测物的保留时间与 （S/N≥3），定量离子对的重构离子色谱峰的信噪比大于或等于10（S/N10）：定性离子对的相对丰度 与浓度相当的标准溶液相比，相对丰度偏差不超过表1的规定，则可判断样品中存在相应的目标化 合物。 表1定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度 >50% >20%~50% >10%~20% %01> ±20% ±25% ±30% ±50% 允许的最大偏差 3