ICS 67.120 X 04 GR 中华人民共和国国家标准 GB/T21316—2007 动物源性食品中磺胺类药物残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法 Determination of residues of sulfonamides in foodstuffs of animal origin- LC-MS/MS 2007-10-29发布 2008-04-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T 21316—2007 前言 本标准的附录A、附录B和附录 C为资料性附录。 本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国山东出人境检验检疫局、中华人民共和国吉林出入境检验检疫 局、中国检验检疫科学研究院。 本标准主要起草人：林黎明张鸿伟、王凤美、牟俊、彭涛、荣会、梁增辉 GB/T21316—2007 动物源性食品中磺胺类药物残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法 1范围 本标准规定了动物源性食品中磺胺类共计23种磺胺药物残留量高效液相色谱-质谱/质谱测定 方法。 本标准适用于肝、肾、肌肉、水产品和牛奶等动物源性食品中磺胺、甲氧苄啶、磺胺索嘧啶、磺胺醋 酰、磺胺嘧啶、磺胺吡啶、磺胺噻唑、磺胺甲嘧啶、磺胺唑、磺胺二甲啶、磺胺甲氧嗪、磺胺甲二唑、磺 胺对甲氧嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺氯达嗪、磺胺多辛、磺胺甲唑、磺胺异唑、磺胺苯酰、磺胺地索 辛、磺胺喹沙啉、磺胺苯吡唑和磺胺硝苯残留量的定性确证和定量测定。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T66821992分析实验室用水规格和试验方法（neqISO3696：1987） 3原理 试样中加入C1s填料后研磨均匀，其中磺胺类药物残留用乙睛-水在微波辐照辅助下进行提取，用乙 睛饱和的正已烷液液分配净化。用液相色谱-质谱/质谱测定，外标法定量。 4试剂和材料 除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682一1992规定的一级水。 4.1乙腈：色谱纯。 4.2甲酸：优级纯。 4.3正已烷：色谱纯。 4.4正丙醇。 4.5无水硫酸钠：优级纯，500℃灼烧4h，置于干燥器中备用。 4.6Cis填料：40μm。 4.7硅藻土：化学纯。 4.8乙睛-水（1000+30）溶液：量取1000mL乙睛，加人30mL水，混合均匀。 4.9乙 乙腈-水（1十1)溶液：将乙腈（4.1)与水按体积比1：1混合均勾。 4.10水-甲酸（999+1）：准确吸取1mL甲酸（4.2）于1000mL容量瓶中，用水稀释到刻度，混匀 分钟，静止分层后，弃去下层乙睛层即得。 4.12标准物质：磺胺胖（sulfaguanidine，SGN）、甲氧啶（trimethoprim，TMP）、磺胺索嘧啶（sulfiso- midine，SIM）、磺胺醋酰（sulfacetamide，SAA）、磺胺嘧啶（sulfadiazine，SDZ）、磺胺吡啶（sulfapyri- dine，SPD）、磺胺噻唑（sulfathiazole，STZ）、磺胺甲嘧啶（sulfamerazine，SMR）、磺胺嗯唑（sulfamox- ole，SMO）、磺胺二甲嘧啶（sulfadimidine，SDM）、磺胺甲氧嗪（sulfamethoxypyridazine，SMP）、磺胺甲 1 GB/T21316—2007 二唑（sulfamethizole，SMT）、磺胺对甲氧嘧啶（sulfamethoxydiazine，SMD）、磺胺间甲氧嘧啶（sulfam- onomethoxine，SMM）、磺胺氯达嗪（sulfachlorpyridazine，SCP）、磺胺多辛（sulfadoxine，SDX）、磺胺甲 唑（sulfamethoxazole，SMZ）、磺胺异嗯唑（sulfafurazole，SFZ）、磺胺苯酰（sulfabenzamide，SBA）、磺 胺地索辛（sulfadimethoxine，SDT）磺胺喹沙啉（sulfaquinoxaline，SQX）、磺胺苯吡唑（sulfaphenazole， SPA）、磺胺硝苯（sulfanitran，SAN），纯度大于等于99%。 4.1323种磺胺标准储备溶液：0.1mg/mL。分别准确称取按其纯度折算为100%的每种磺胺标准物 4.1423种磺胺混合标准中间溶液：10μg/mL。准确移取各种磺胺类标准储备溶液（4.13）10mL于 100mL棕色容量瓶中，用乙睛定容至刻度。该混合标准中间溶液在一20℃避光保存，有效期6个月。 的混合标准工作溶液，现用现配。 园 5仪器和设备 5.1液相色谱-质谱串联仪：配有电喷雾离子源。 5.27 高速组织捣碎机。 3均质器。 5. 3 5.4 旋转蒸发器。 5. 5 5氮吹仪。 5.6涡旋混匀器 5.7 分析天平：感量0.1mg和0.01g各一台。 5.8 真空泵。 5.9# 移液器：1mL，2mL。 5.10 棕色鸡心瓶：150mL。 5.117 样品瓶：2mL，带聚四氟乙烯旋盖。 5.12大号玻璃研钵。 5.13pH计：测量精度±0.2 5.14 离心机。 5. 15 棕色分液漏斗：100mL。 5.16 具螺旋盖聚四氟乙烯离心管：50mL。 5. 17 超纯水仪。 5.18 微波炉：家用，带有光波模式，功率700W。 5.19超声波发生器。 6试样制备与保存 6.1肌肉、内脏、鱼和虾 从原始样品中取出代表性样品，经高速组织捣碎机均匀捣碎，用四分法缩分出适量试样，均分成两 份，分别装人清洁容器内，加封后作出标记，一份作为试样，一份作为留样。将试样于一20℃保存。 6.2肠衣 从原始样品中取出代表性样品，用剪刀剪成4mm的碎片，用四分法缩分出适量试样，均分成两 份，分别装人洁净容器内，加封后作出标记，一份作为试样，一份作为留样。将试样于一20℃保存。 6.3牛奶 从原始样品中取出代表性样品，用组织捣碎机充分混匀，均分成两份，分别装人洁净容器内，加封后 作出标记，一份作为试样，一份作为留样。将试样于4℃避光保存。 2 GB/T21316—2007 7样品处理 7.1提取 7.1. 1肌肉、内脏、鱼、虾和肠衣 称取2g（精确至0.01g）试样置于玻璃研钵内，再称取约6g（精确至0.01g）C1.填料（4.6）加至试 样上用玻璃杆轻轻研磨，使样品与填料混合均匀（色泽均一，状态分散），装于50mL具螺旋盖聚四氟乙 烯离心管中，加人25mL乙睛-水溶液（4.8），旋涡振荡1min，放人家用微波炉中在光波模式下微波辐 照30s，3000r/min离心5min，将乙睛层移入100mL棕色分液漏斗中。离心后的沉淀物再加入 25mL乙睛摇匀，微波辅助提取30s，3000r/min离心5min，合并乙提取液，待净化。 7.1.2牛奶 取2g（精确至0.01g)牛奶，置于玻璃研钵内，加入6g（精确至0.01g)硅藻土（4.7)，另加人6g （精确至0.01g)C18填料（4.6），用玻璃杵轻轻研磨30s，使样品与填料混合均勾（色泽均一，状态分散）， 装于50mL具螺旋盖聚四氟乙烯试管中，加人25mL乙腈-水溶液（4.8），旋涡振荡1min，放人家用微 波炉中光波模式下微波辐照30s，于3000r/min离心5min，将乙腈层移人100mL棕色分液漏斗中。 离心后的沉淀物再加人25mL乙睛摇匀，微波辅助提取30s，于3000r/min离心5min，合并乙提取 液，待净化。 7.2净化 提取液中加入25mL乙睛饱和正已烷溶液（4.11），振摇5min，将底层乙睛溶液移人150mL棕色 加入1mL乙睛-水溶液（4.9），超声30s溶解残渣，将溶解液移人10mL棕色离心管中，加0.5mL乙 腈饱和正已烷（4.11），涡旋振荡2min，于3000r/min离心5min，弃去正已烷溶液，取底层乙睛-水溶液 过0.22μm微孔滤膜，供高效液相色谱-质谱/质谱测定。 8测定 8.1标准工作曲线制备 用相应的空白样品基质提取液制备混合标准浓度系列，分别为10ng/mL、20ng/mL、100ng/mL、 200ng/mL、1000ng/mL（分别相当于测试样品中含有5μg/kg、10μg/kg、20μg/kg、100μg/kg、 500ug/kg的目标化合物），按8.2和8.3规定测定并制备标准曲线。 8.2液相色谱条件 a）色谱柱：IntersilODS-3，5μm，150mmX4.6mm（内径），或相当者； b) 流动相及洗脱条件见表1； 表1# 流动相及梯度洗脱条件 时间/min 流动相A（乙腈） 流动相B(0.1%甲酸） 0. 0 0. 5 99,5 5.0 10 90 25.0 50 50 30.0 40 60 30.5 0.5 99.5 40.0 0.5 99.5 c) 流速：0.8mL/min; 柱温：20℃； e) 进样量：20μL。 3