ICS 67.120 x 04 GP 中华人民共和国国家标准 GB/T21311—2007 动物源性食品中硝基呋喃类药物代谢物 残留量检测方法 高效液相色谱/串联质谱法 Determination of residues of nitrofuran metabolites in foodstuffs of animal originHPLC-MS/MS method 2007-10-29发布 2008-04-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T 21311—2007 前言 本标准的附录A、附录B、附录C均为资料性附录。 本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出并归口。 本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国山东出入境检验检疫局。 本标准主要起草人：彭涛、李晓娟、国伟、孙利、林黎明、于静、邱月明、储晓刚、唐英章 GB/T21311—2007 动物源性食品中硝基喃类药物代谢物 残留量检测方法 高效液相色谱/串联质谱法 1范围 本标准规定了动物源性食品中硝基喃类药物代谢物3-氨基-2-恶唑酮（3-amino-2-oxalidinone， AOZ）、5-吗琳甲基-3-氨基-2-恶唑烷基酮（5-morpholinomethyl-3-amino-2-oxalidinone，AMOZ）、1-氨 基-乙内酰脉（1-amino-hydantoin，AHD）和氨基脉（semicarbazide，SEM）残留量的高效液相色谱/串联 质谱测定方法。 本标准适用于肌肉、内脏、鱼、虾、蛋、奶、蜂蜜和肠衣中硝基呋喃类药物代谢物3-氨基-2-恶唑酮、 5-吗啉甲基-3-氨基-2-恶唑烷基酮、1-氨基-乙内酰脲和氨基脲残留量的定性确证和定量测定。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准， GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682—1992，neqISO3696：1987） 3原理 样品经盐酸水解，邻硝基苯甲醛过夜衍生，调pH值7.4后，用乙酸乙酯提取，正已烷净化。分析物 采用高效液相色谱/串联质谱定性检测，采用稳定同位素内标法进行定量测定。 4试剂和材料 除非另有说明，所有试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。 4.1甲醇：高效液相色谱级。 4.2乙睛：高效液相色谱级。 4.3乙 乙酸乙酯：高效液相色谱级。 4.4正已烷：高效液相色谱级。 4.5浓盐酸。 4.6 氢氧化钠。 4.7 甲酸：高效液相色谱级。 邻硝基苯甲醛。 4. 9 三水磷酸钾。 4.10乙酸铵。 4.110.2mol/L盐酸溶液：准确量取17mL浓盐酸（4.5），用水定容至1L。 4.122.0mol/L氢氧化钠溶液：准确称取80g氢氧化钠（4.6）,用水溶解并定容至1L。 4.130.1mol/L邻硝基苯甲醛溶液：准确称取1.5g邻硝基苯甲醛（4.8），用甲醇溶解并定容至 100 mL。 4.140.3mol/L磷酸钾溶液：准确称取79.893g三水磷酸钾（4.9）,用水溶解并定容至1L。 1 GB/T21311—2007 4.15乙睛饱和的正已烷：量取正已烷80mL于100mL分液漏斗中，加入适量乙睛后，剧烈振摇，待分 配平衡后，弃去乙睛层即得。 4.160.1%甲酸水溶液（含0.0005mol/L乙酸铵）：准确量取1mL甲酸（4.7）和称取0.0386g乙酸 铵（4.10）于1L容量瓶中，用水定容至1L 4.17标准物质：3-氨基-2-恶唑酮、5-吗啉甲基-3-氨基-2-恶唑烷基酮、1-氨基-乙内酰脲、氨基 脲，纯度≥99%。 Ds-AMOZ;1-氨基-乙内酰脲的内标物，13C-AHD；氨基脲的内标物，13C15N-SEM,纯度99%。 4.19标准储备液：分别准确称取适量标准品（精确至0.0001g），用乙睛溶解，配制成浓度为 100mg/L的标准储备溶液，一18℃冷冻避光保存，有效期3个月。 度，配制成浓度为1mg/L的混合中间标准溶液，4℃冷藏避光保存，有效期1个月。 至刻度，配制成浓度为0.01mg/L的混合标准工作溶液，4℃冷藏避光保存，有效期1周。 4.22内标储备液：准确称取适量内标物质（精确至0.0001g），用乙睛溶解，配制成浓度为100mg/L 的标准储备溶液，一18℃冷冻避光保存，有效期3个月。 4.23中间内标标准溶液：准确移取1mL内标储备液（4.22）于100mL容量瓶中，用乙睛定容至刻度， 配制成浓度为1mg/L的中间内标标准溶液，4℃冷藏避光保存，有效期1个月。 4.24混合内标标准溶液：准确移取中间内标标准溶液（4.23）各0.1mL于10mL容量瓶中，用乙睛定 容至刻度，配制成浓度为0.01mg/L的混合内标标准溶液，4℃冷藏避光保存，有效期1周。 4.25微孔滤膜：0.20μm，有机相。 4.26氮气：纯度≥99.999%。 4.27氩气：纯度≥99.999%。 5仪器和设备 5.1液相色谱/串联质谱仪：配备电喷雾离子源（ESI)。 5.2 组织捣碎机。 5. 3 分析天平：感量0.0001g，0.01g。 5.4均质器：10000r/min。 5. 5 振荡器。 5.6恒温箱。 5.7pH计：测量精度土0.02pH单位。 5.8离心机：10000r/min。 5.9氮吹仪。 5.10 旋涡混合器。 5.11容量瓶：1L,100mL10mL。 5.12 2具塞塑料离心管：50mL。 5.13刻度试管：10mL。 5.14移液枪：5mL,lmL,100μL。 6试样制备与保存 6.1肌肉、内脏、鱼和虾 从原始样品取出有代表性样品约500g，用组织捣碎机充分碎混匀，均分成两份，分别装人洁净容 2 GB/T21311—2007 器作为试样，密封，并标明标记。将试样置于一18℃冷冻避光保存。 6.2肠衣 从原始样品取出有代表性样品约100g，用剪刀剪成边长<5mm的方块，混匀后均分成两份，分别 装人洁净容器作为试样，密封，并标明标记。将试样置于一18℃冷冻避光保存。 6.3蛋 从原始样品取出有代表性样品约500g，去壳后用组织捣碎机搅拌充分混匀，均分成两份，分别装入 洁净容器作为试样，密封，并标明标记。将试样置于4℃冷藏避光保存。 6.4奶和蜂蜜 从原始样品取出有代表性样品约500g，用组织捣碎机充分混匀，均分成两份，分别装入洁净容器作 为试样，密封，并标明标记。将试样置于4℃冷藏避光保存。 注：在制样的操作过程中，应防止样品污染或残留物含量发生变化。 7样品处理 7.1水解和衍生化 7. 1. 1肌肉、内脏、鱼、虾和肠衣 称取约2g试样（精确至0.01g）于50mL塑料离心管中，加人10mL甲醇-水混合溶液（1十1，体积 比），振荡10min后，以4000r/min离心5min，弃去液体。残留物中加人10mL0.2mol/L盐酸，用均 质器以10000r/min均质1min后，再依次加人混合内标标准溶液（4.24)100μL，邻硝基苯甲醛溶液 （4.13)100μL，涡动混合30s后，再振荡30min，置37℃恒温箱中过夜（16h）反应。 7.1.2蛋、奶和蜂蜜 称取约2g试样（精确至0.01g）于50mL塑料离心管中，加人10mL~20mL0.2mol/L盐酸（以 样品完全浸润为准），用均质器以10000r/min均质1min后，再依次加人混合内标标准溶液（4.24） 100μL，邻硝基苯甲醛溶液（4.13）100μL，涡动混合30s后，再振荡30min，置37℃恒温箱中过夜 (16 h)反应。 7.2提取和净化 取出样品，冷却至室温，加人1mL~2mL0.3mol/L磷酸钾（1mL盐酸溶液加0.1mL磷酸钾溶 液），用2.0mol/L氢氧化钠调pH7.4（王0.2）后，再加入10mL～20mL乙酸乙酯（乙酸乙酯加人体积 与盐酸溶液体积一致），振荡提取10min后，以10000r/min离心10min，收集乙酸乙酯层。残留物用 10mL~20mL乙酸乙酯再提取一次，合并乙酸乙酯层。收集液在40℃下用N²吹干，残渣用1mL 0.1%甲酸水溶液（4.16）溶解，再用3mL乙睛饱和的正已烷（4.15）分两次液液分配，去除脂肪。下层 水相过0.20μm微孔滤膜后，取10μL供仪器测定。 7.3混合基质标准溶液的制备 7.3.1肌肉、内脏、鱼、虾和肠衣 称取5份约2g的阴性试样（精确至0.01g）于50mL塑料离心管中，加入10mL甲醇-水混合溶液 （1十1，体积比），振荡10min后，以4000r/min离心5min，弃去液体。残留物中加人10mL 0.2mol/L盐酸，用均质器以10000r/min均质1min后，按照最终定容浓度：1、5、10、50、100ng/mL， 100uL，余下操作同7.1.1和7.2。 7.3.2蛋、奶和蜂蜜 称取5份约2g的阴性试样（精确至0.01g）于50mL塑料离心管中，加人10mL~20mL 0.2mol/L盐酸（以样品完全浸润为准），用均质器以100oor/min均质1min后，按照最终定容浓度： 1、5、10、50、100ng/mL，分别加人混合中间标准溶液（4.20）或混合标准工作溶液（4.21），再加人混合内 标标准溶液（4.24)100μL，余下操作同7.1.2和7.2。 3