ICS 67.120 X 04 GB 中华人民共和国国家标准 GB/T 21318—2007 动物源食品中硝基咪唑残留量 检验方法 Determination of nitroimidazoles residues in foodstuffs of animal origin 2008-04-01实施 2007-10-29发布 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T 21318—2007 前言 本标准的附录A、附录B、附录 C、附录D为资料性附录。 本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国吉林出入境检验检疫局、中华人民共和国山东出人境检验检疫 局、中国检验检疫科学研究院。 本标准主要起草人：荣会、牟峻、张代辉、林黎明、张鸿伟、马书民、赵庆松、李晓娟、彭涛 GB/T213182007 引言 硝基咪唑类药物主要包括4-硝基咪唑、异丙硝唑、2-甲硝咪唑、洛硝哒唑、甲硝唑、氯甲硝咪唑、地美 硝唑、苯硝咪唑，是一类抗菌素和抗原虫药。硝基咪唑类药物在体内吸收快，所以标示残留物除了原形 药物外，还包括代谢产物羟基甲硝唑MNZOH（甲硝唑代谢物）、羟甲基甲硝咪唑HMMNI（2-甲硝咪唑 洛硝哒唑代谢物），它们具有损害细菌DNA和抗厌氧菌感染的功效。该类药物主要用于治疗和预防厌 氧菌引起的局部或系统感染，抑制厌氧菌的DNA合成，也用于抗滴虫和阿米巴原虫等。由于硝基咪唑 类药物含有的硝基杂环类化合物具有细胞诱变性，从而导致此类药物有致癌作用和潜在的致畸作用。 因此，硝基咪唑类药物在大多数国家为禁止使用或允许使用但必须严格监控的药物 本标准提供了动物源食品中硝基咪唑类及代谢物的高效液相色谱/串联质谱多残留确证方法。 GB/T21318—2007 动物源食品中硝基咪唑残留量 检验方法 1范围 本标准规定了动物源性食品中硝基咪唑原药8种、代谢产物2种残留量的高效液相色谱/串联质谱 测定方法。 本标准适用于猪肉、鸡肉、牛肉、猪肝、鸡肝、牛肝、猪肾、牛肾、鱼肉、奶粉、蜂蜜中：4-硝基咪唑、异丙 硝唑、2-甲硝咪唑、洛硝哒唑、甲硝唑、氯甲硝咪唑、地美硝唑、苯硝咪唑残留量及其代谢物羟基甲硝唑 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682—1992，neqISO3696：1987） 3原理 样品中残留的8种硝基咪唑、2种代谢物用甲醇-丙酮均质或超声波提取，经乙酸乙酯液液分配，以 凝胶色谱（GPC)净化，再经固相萃取（SPE)净化，采用液相色谱/串联质谱确证，外标法定量测定。 4试剂和材料 除非另有说明，所有试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。 4.1甲醇HPLC级。 4.2丙酮：HPLC级、 4.3乙酸乙酯:HPLC级。 4.4环已烷：HPLC级 4.5 氯化钠。 4. 6 无水硫酸钠：经650℃灼烧4h，贮于密封容器中备用。 4.7 甲酸：优级纯。 4.8饱和氯化钠水溶液。 4.9硅藻土：80目~120目。 4.10Cis固相萃取柱:1.0g.6mL。 4.11 微孔滤膜：有机系，0.45um。 4.12 硝基咪唑原药8种、代谢产物2种标准物质：纯度均大于等于98%（详见附录A）。 4.13标准储备液：分别准确称取适量的每种标准物质，用甲醇配制成浓度为1000μg/mL的标准储 备液。该溶液应配制于棕色容量瓶中，在0℃4℃冰箱中可保存12个月 4.14混合中间标准溶液：分别准确移取一定体积的每种标准储备液，用甲醇稀释成适当浓度的混合中 间标准溶液。该溶液应配制于棕色容量瓶中，在0℃～4℃冰箱中可保存6个月。 1 GB/T213182007 4.15 5混合标准工作溶液：分别准确移取一定体积的混合中间标准溶液，可根据需要用甲醇稀释成适当 浓度的混合标准工作溶液。该溶液应配制于棕色容量瓶中，在0℃～4℃冰箱中可保存3个月。 5仪器和设备 5.1液相色谱-串联质谱仪：配电喷雾离子源串联四极杆检测器。 5.2 凝胶色谱仪：配有馏份收集浓缩器。 5. 3 组织捣碎机。 5.4均质器。 5.5超声波发生器。 5. 6 旋转蒸发器。 5.7 高速离心机。 3氮吹仪。 5.8 5.9具塞锥型瓶：250mL。 5.10分液漏斗：250mL。 5.11浓缩瓶：50mL、250ml。 6试样制备与保存 6.1肌肉组织及器脏组织类、水产品类 从原始样品中取出有代表性样品（脏器应剔除筋膜）约500g，用组织捣碎机充分捣碎混匀，均分成 两份，分别装人洁净的容器作为试样，密封并标明标记，将试样置于一18℃冷冻避光保存。 6.2乳及乳制品类 从原始样品中取出有代表性样品约500g，用组织捣碎机充分捣碎混匀，均分成两份，分别装人洁净 的容器作为试样，密封并标明标记，将试样置于4℃冷藏避光保存。 6.3蜂蜜 从原始样品中取出有代表性样品约200g，对无结晶的蜂蜜样品用组织捣碎机充分捣碎混匀，均分 成两份，分别装人洁净的容器作为试样，密封并标明标记，将试样置于4℃冷藏避光保存；对有结晶析出 的蜂蜜样品，在密闭情况下，将样品瓶置于不超过60℃的水浴中温热，振荡，待样品全部融化后用组织 捣碎机充分捣碎混匀，均分成两份，分别装人洁净的容器作为试样，密封并标明标记，将试样置于4℃冷 藏避光保存。在融化时应注意防止水分挥发 在制样的操作过程中，应防止样品污染或残留物含量发生变化 7样品处理 7.1提取 7.1.1肌肉组织、脏器组织样品及水产品 准确称取约20g样品（精确至0.1g）于250mL具塞锥形瓶中，加10g硅藻王（4.9）与样品充分 混匀，再依次加人5mL饱和氯化钠水溶液和70mL甲醇-丙酮（3+1），高速均质提取3min。将提取液 移人离心管中，于10000r/min条件下离心2min，将上层提取液移人250mL浓缩瓶中，残渣每次再用 50mL甲醇-丙酮（3十1)重复提取两次，合并提取液。 7.1.2蜂蜜、乳及乳制品样品 分别准确称取约20g样品（精确至0.1g）于250mL具塞锥形瓶中，加入10mL饱和氯化钠水溶 液和70mL甲醇-丙酮（3+1），超声波提取30min。移人离心管中，于10000r/min条件下离心2min， 2