ICS 13.060 Z 16 GB 中华人民共和国国家标准 GB/T21970—2008 水质 组胺等五种生物胺的测定 高效液相色谱法 Water qualityDetermination of putrescine,cadaverine,spermidine, spermine and histamineHigh performance liquid chromatography method 2008-06-11发布 2008-06-11实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T21970—2008 前言 本标准的附录A、附录B、附录 C为资料性附录。 本标准由全国仪器分析测试标准化技术委员会归口。 本标准负责起草单位：中国医学科学院药物研究所、中国计量科学研究院。 所、中国科学院生态环境研究中心、北京理工大学、国家地质实验测试中心、岛津北京分析中心、北京市 理化分析测试中心、中国农业科学院、中国地质大学（北京）中国测试技术研究院 本标准主要起草人：杜冠华、吕扬、李红梅、王琰、董方霆 GB/T21970—2008 水质 组胺等五种生物胺的测定 高效液相色谱法 1范围 本标准规定了用苯甲酰氯衍生化-高效液相色谱-紫外检测法测定水中腐胺、尸胺、亚精胺、精胺及 组胺含量的方法。 本标准适用于水中2.0mg/L~40.0mg/L的腐胺、尸胺、亚精胺、精胺及组胺的测定。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T6379.1一2004测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第1部分：总则与定义 GB/T6379.2一2004测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测量方 法重复性与再现性的基本方法 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682—1992，neqISO3696：1987) GB/T12999水质采样样品的保存和管理技术规定 3术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 3.1 水样 watersample 供实验室检验或测试的未经处理的水。 3.2 试样treatedwater 经过衍生化和萃取处理后，供高效液相色谱仪测试用水样。 4原理 水样经苯甲酰氯衍生化后用乙醚萃取，萃取物经溶剂转换后用高效液相色谱-紫外检测器检测，外 标法定量。 SAC 5试剂和材料 除另有说明外，所用试剂均为分析纯，实验用水为GB/T6682规定的一级水。 5.1苯甲酰氯(CHsOCI)。 5.2乙醚(C4H1oO)。 5.3甲醇（CH4O)：色谱纯。 5.4乙腈（C2H3N)：色谱纯。 5.5氯化钠(NaCI)。 5.6多 氮气（N2）：99.99%。 1 GB/T21970—2008 5.7滤膜：0.45μm，水相。 5.8一次性过滤器：$13mm~15mm，0.45μm，有机相。 5.9氢氧化钠(NaOH)溶液:2.0mol/L。 称取4g氢氧化钠，用50mL水溶解完全后，混匀。 5.10乙酸铵（CH3COONH）溶液：0.02mol/L。 称取1.54g乙酸铵于1L容量瓶中，用水完全溶解，稀释至刻度，经滤膜（5.7）过滤。 5.11腐胺标准贮备溶液：1.00mg/mL。 准确称取0.1827g盐酸腐胺（C4H12N2·2HCl,纯度≥99%）准确至0.0001g，于100mL容量瓶 中，用水溶解完全后，稀释至刻度，混匀。于4℃保存，有效期为3个月。 5.12户胺（CsH14N2）标准贮备溶液：1.00mg/mL。 准确称取0.1000g户胺（纯度≥99%）准确至0.0001g，于100mL容量瓶中，用水完全溶解后，稀 释至刻度，混匀。于4℃保存，有效期为3个月。 5.13亚精胺（CH1gN3）标准贮备溶液：1.00mg/mL。 准确称取0.1000g亚精胺（纯度≥99%）准确至0.0001g，于100mL容量瓶中，用水完全溶解后， 稀释至刻度，混匀。于4℃保存，有效期为3个月。 5.14精胺（C1oH26N4）标准贮备溶液：1.00mg/mL。 准确称取0.1000g精胺（纯度≥99%）准确至0.0001g，于100mL容量瓶中，用水完全溶解后，稀 释至刻度，混匀。于4℃保存，有效期为3个月。 5.15组胺（CsHgN3）标准贮备溶液：1.00mg/mL。 准确称取0.1000g组胺（纯度≥99%）准确至0.0001g，于100mL容量瓶中，用水完全溶解后，稀 释至刻度，混匀。于4℃保存，有效期为3个月。 5.16标准工作溶液：使用时配制。 5.16.1分别移取10.0mL腐胺（5.11）、户胺（5.12）、亚精胺（5.13）、精胺（5.14）及组胺（5.15）标准贮 备溶液，置于100mL容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀，获得标准混合溶液。此标准混合溶液1mL含 腐胺、户胺、亚精胺、精胺及组胺各0.100mg。 5.16.2按表1分别移取不同体积的标准混合溶液（5.16.1）置于50mL容量瓶中，用水稀释至刻度， 混匀。 表1标准工作溶液配制 标准混合溶液体积/mL 1. 00 2. 00 5.00 10.00 20.00 腐胺、户胺、亚精胺、精胺、组胺浓度/（mg/L） 2.00 4.00 10.00 20.00 40.00 50 50 50 定容体积/mL 50 50 6仪器 6.1高效液相色谱仪，紫外检测器：带梯度洗脱装置。 6.2色谱柱：C18色谱柱，或性能相当者。 6.3液体混匀器（或称涡旋混匀器）。 6.4恒温水浴箱。 6.5具塞刻度试管：10mL。 6.6分析天平：感量0.1mg。 7样品的制备和保存 7.1水样保存 水样密封，于4℃保存，保存期不超过7d。 2 GB/T21970—2008 7.2试样保存 试样密封，于4℃保存，保存期不超过7d。 8测定步骤 警告：由于有机生物胺成分可能存在有一定的毒副作用及过敏反应，实施本标准操作时建议配戴口 罩和橡胶手套。 8.1水样的衍生和萃取 8.1.1移取2.00mL水样置于10mL具塞刻度试管（6.5）中，加人1mL氢氧化钠溶液（5.9）、20μL 苯甲酰氯（5.1），在液体混匀器（6.3）上涡旋30s，置于37℃水浴（6.4）中振荡，反应时间20min，反应期 间每隔5min涡旋 30 s。 8.1.2衍生反应完毕后，加人1g氯化钠（5.5）、2mL乙醚（5.2），振荡混匀，涡旋30s，静置。待溶液 分层后，用滴管将乙醚层完全移取至10mL具塞刻度试管（6.5）中，用氮气（5.6）或吸耳球缓缓吹干乙 醚，加1.00mL甲醇（5.3)溶解，再用一次性过滤器（5.8)过滤后，作为高效液相色谱分析用试样。 8.2不同浓度标准工作溶液的衍生和萃取 8.2.1移取2.00mL不同浓度的标准工作溶液分别置于5个10mL具塞刻度试管（6.5）中，加入 1mL氢氧化钠溶液（5.9）、20μL苯甲酰氯（5.1），在液体混匀器（6.3）上涡旋30s充分混匀。 8.2.2萃取步骤同8.1.2。 8.3高效液相色谱测定 8.3.1色谱条件 a) 色谱柱：C1s色谱柱，5μm，4.6mm×250mm，或性能相当者； b) 柱温：室温； c) 流动相：A（乙腈）,B（0.02mol/L乙酸铵）。梯度洗脱条件见表2； 检测波长：254nm； e) 进样量：20μL。 表2梯度洗脱条件 时间/min 流速/（mL/min） A(乙睛）/% B(0.02mol/L乙酸铵)/% 0.00 1. 0 30 70 5.00 1. 0 75 25 10.00 1. 0 75 25 15.00 1. 0 30 70 8.3.2液相色谱分析测定 8.3.2.1仪器的准备 开机，预热，使用流动相冲洗色谱柱，待基线稳定30min后开始进样。 8.3.2.2定性分析 利用保留时间定性法。根据腐胺、户胺、亚精胺、精胺及组胺的标准色谱图（参见附录A）中各物质 的保留时间，确定样品中物质。 8.3.2.3定量分析 校准方法为外标法。 SAC 8.3.2.3.1校准曲线制作 使用衍生化的标准工作溶液（8.2.2)分别进样，以标准工作溶液浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标， 分别绘制腐胺、尸胺、亚精胺、精胺及组胺的校准曲线。 3