ICS 65.120 B 46 GB 中华人民共和国国家标准 GB/T22259—2008 饲料中土霉素的测定 高效液相色谱法 Determination of oxytetracycline in feeds- High performance liquid chromatography 2008-08-01发布 2008-11-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T22259—2008 前言 本标准的附录A为资料性附录。 本标准由全国饲料工业标准化技术委员会提出并归口。 本标准起草单位：农业部饲料质量监督检验测试中心（南京） 本标准主要起草人：宋慧敏、耿士伟、冯三令、储瑞武、冯群科、贾书静。 GB/T22259—2008 饲料中土霉素的测定 高效液相色谱法 1范围 本标准规定了饲料中土霉素含量的高效液相色谱测定方法。 本标准适用于配合饲料、浓缩饲料、添加剂预混合饲料中土霉素的测定，检出限为0.5mg/kg，定量 限为2 mg/kg 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682—1992，neqISO3696：1987) GB/T14699.1饲料采样 GB/T20195动物饲料试样的制备 3原理 （或二极管阵列检测器）检测，外标法计算土霉素的含量。 4试剂和溶液 除特殊说明外，所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水，色谱用水符合GB/T6682中一级用水规定 4.1盐酸：优级纯。 4.2盐酸溶液（0.05mol/L）：取盐酸（4.1)4.5mL，溶解于1000mL水中。 4.3乙腈：色谱纯。 4.4磷酸二氢钠。 4.5磷酸。 4.6磷酸盐缓冲液：取磷酸二氢钠（4.4)1.2g，加水使溶解并稀释至1000mL，用磷酸（4.5）调pH值 至3.50，摇匀，过滤。 4.7土霉素标准品：纯度应大于97.0%。 4.8土霉素标准贮备液：准确称取已知纯度的土霉素标准品20mg，置于100mL棕色容量瓶中，用盐 酸溶液（4.2）溶解定容、摇匀，其浓度为0.2mg/mL。贮存于4C冰箱中，溶液有效期1个月。 100mL棕色容量瓶中，用水定容至刻度。该标准系列中土霉素的相应浓度分别为0.1、1、5、15、25、 50μg/mL。现配现用。 5仪器和设备 5.1分析天平：感量0.0001g。 5.2振荡器。 1 GB/T22259—2008 5.3 超纯水处理器。 5.4 高效液相色谱仪：紫外检测器（或二极管阵列检测器）。 5.5 pH计。 5. 6 0.45μm滤膜。 6试样制备 6.1按GB/T14699.1采样。 6.2选取具有代表性的饲料样品至少500g，按GB/T20195制备样品。 7分析步骤 7.1试样溶液的制备 称取试样适量（配合饲料10g、浓缩饲料5g、预混料1g）精确至1mg。置于250mL具塞锥形瓶 中，准确加人100mL盐酸溶液（4.2），于振荡器上振荡提取10min，溶液用滤纸过滤或用盐酸溶液 （4.2）作适当稀释，滤液过0.45μm滤膜（5.6），备用。 7.2色谱条件 7.2.1色谱柱：Cl.柱，柱长150mm，内径4.6mm，粒径为5μm，或相当者。 7.2.2柱温：室温。 7.2.3流动相：磷酸缓冲液（4.6）十乙睛=84十16，混匀，脱气。 7.2.4流速：1.0mL/min。 7.2.5检测器：紫外检测器（或二极管阵列检测器），检测波长353nm。 7.2.6进样量：20μL。 7.3定量测定 按上述色谱条件，分别将土霉素标准曲线工作液（4.9）及试样溶液（7.1）上机测定，以单点或多点校 准，以色谱峰面积积分值定量。 8结果计算 SZC 试样中土霉素的含量（X）以质量分数（mg/kg）表示，按式（1)计算： CXV X= 9 :(1) 式中： X—试样中土霉素的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）； Cr——试样溶液中土霉素的含量，单位为微克每毫升（μg/mL)； m——试样质量，单位为克（g）； V一样品的稀释液总体积，单位为毫升（mL）。 结果用平行测定的算术平均值表示，保留三位有效数字。 9精密度 在重复性试验条件下两次平行测定结果的相对偏差不大于10%。 2 GB/T22259—2008 附录A （资料性附录） 土霉素标准溶液图谱 mAL 20 5.664 15 ] 10 J 0 -5 1 1 2 3 4 5 8 9 min 图 A. 1 土霉素标准溶液图谱（1μg/mL)