ICS 65.120 B 46 GB 中华人民共和国国家标准 GB/T 22262—2008 饲料中氯羟吡啶的测定 高效液相色谱法 Determination of clopidol in feeds- High performance liquid chromatography 2008-08-01发布 2008-11-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T22262—2008 前言 本标准的附录A为资料性附录。 本标准由中华人民共和国农业部提出 本标准由全国饲料工业标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所[国家饲料质量监督检验中心 (北京）。 本标准主要起草人：索德成、李兰、魏书林， GB/T22262—2008 饲料中氯羟吡啶的测定 高效液相色谱法 1范围 本标准规定了高效液相色谱仪测定饲料中氯羟吡啶的方法。 本标准适用于配合饲料、预混合饲料及浓缩饲料中氯羟吡啶的测定。方法最低定量限为1mg/kg。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682—1992，neqISO3696：1987) GB/T14699.1饲料采样 GB/T20195动物饲料试样的制备 3原理 试样中氯羟吡啶经甲醇提取，用氧化铝柱净化分离，浓缩后用甲醇溶解，注人高效液相色谱仪反相 色谱系统中进行分离，用紫外检测器进行测定。 4试剂和溶液 除非另有规定，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和符合GB/T6682规定的一级用水。 4.1乙腈：色谱纯。 4.2甲醇。 后，放人干燥器中备用。 4.4氯羟吡啶标准品：纯度均应大于95%。 4.5氯羟吡啶标准溶液 4.5.1氯羟吡啶标准贮备液：分别准确称取已知纯度的氯羟吡啶标准品10mg（精确至0.0001g），置 于100mL棕色容量瓶中，加甲醇（4.2）超声使之完全溶解，并定容至刻度，摇匀。该溶液中氯羟吡啶浓 度为100μg/mL，于4℃保存可使用6个月。 4.5.2氯羟吡啶标准工作液：准确移取氯羟吡啶5mL，置于50mL棕色容量瓶中，用甲醇（4.2）定容 至刻度，该溶液中氯羟吡啶浓度均为10μg/mL，于4℃保存可使用1个月。 5仪器和设备 除实验室常用仪器和设备外，还包括以下仪器和设备。 5.1电子天平：精度为0.0001g。 5.2振荡器。 5.3高效液相色谱仪：配二极管矩阵检测器或紫外检测器。 5.4滤膜：孔径为0.45μm。 1 GB/T22262—2008 5.5离心机：5000r/min。 5.6旋转蒸发器：50℃。 5.7涡轮混合器：2500r/min。 5.8氧化铝净化柱：长度200mm，内径10mm玻璃柱。柱底部装有G4砂芯板，装入氧化铝约10cm 的高度，使用前用20mL甲醇淋洗。 6试样的选取和制备 6.1按GB/T14699.1采样。 6.2选取有代表性饲料样品至少500g，按GB/T20195制备样品。 7分析步骤 7.1试液的制备 7.1.1提取 50mL离心管中，加人甲醇25mL，旋涡混合，于振荡器振荡30min，3000r/min离心5min，取上清液 备用。 7.1.2净化 准确吸取上清液10mL，移入氧化铝净化柱中，用10mL甲醇洗柱内壁。将过柱溶液及洗脱液全 部接收于旋转蒸发瓶中，用50℃水浴的旋转蒸发器将溶剂蒸干。用1mL甲醇溶解残渣，过0.45μm 的滤膜，滤液进液相色谱仪检测。 7.2测定 7.2.1液相色谱条件 色谱柱：具有Cis填料的柱子（粒度为5μm），柱长150mm，内径4.6mm。 流动相：乙睛十水=10+90（体积比），以1.0mL/min流速洗脱。 检测器：二极管矩阵检测器或紫外检测器，检测波长为270nm 7.2.2定量测定 按高效液相色谱仪说明书调整仪器操作参数。向液相色谱柱中注人待测定氯羟吡啶标准工作液 （4.5.2)及试液（7.1)，得到色谱峰面积响应值，用外标法定量。 7.2.3结果计算 试样中氯吡啶的含量X以质量分数（mg/kg）表示，按式（1）计算： P,XVXcXVst X= :(1) PtXmXV. 式中： 试样溶液峰面积值；SZC V样品的总稀释体积，单位为毫升（mL)； 标准溶液浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）； Vs——标准溶液进样体积，单位为微升（μL)； P——标准溶液峰面积平均值； m——试样质量，单位为克(g)； V一一试样溶液进样体积，单位为微升（μL）。 平行测定结果用算术平均值表示，保留三位有效数字。 8重复性 同一分析者对同一试样同时两次平行测定结果的相对偏差不大于10%。 2 GB/T 22262—2008 附 A （资料性附录） 氯羟吡啶标准图谱 286元 InALI 35 30 : 25号 20 15 = 10 = 1/ 5 : Jir 0=. 0 ti 12 11 min 图 A.1 氯羟吡啶标准溶液色谱图