ICS 67.120.30 B 50 GR 中华人民共和国国家标准 GB/T22286—2008 动物源性食品中多种β-受体激动剂 残留量的测定 液相色谱串联质谱法 Determination of β-agonists residues in foodstuff of animal origin- Liquid chromatography with tandem-mass spectrometric method 2008-08-12发布 2008-12-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T 22286—2008 前言 本标准的附录A为资料性附录。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国上海出入境检验检疫局、上海市疾病预防控制中心、上海水产大 学、中华人民共和国浦江出人境检验检疫局。 本标准主要起草人：郭德华、汪国权、金玉娥、李波、王锡昌、钟一亮、邓晓军、靳海彤、杨景贤、 GB/T22286—2008 动物源性食品中多种-受体激动剂 残留量的测定，液相色谱串联质谱法 1范围 本标准规定了动物源性食品中沙丁胺醇（salbutamol）、特布他林（terbutaline）、塞曼特罗（cimat- erol）、塞布特罗（cimbuterol）、莱克多巴胺（ractompamine）、克仑特罗（clenbuterol）、溴布特罗（brombu- chlorbuterol)残留量的液相色谱-串联质谱的测定方法。 本标准适用于猪肝和猪肉中沙丁胺醇、特布他林、塞曼特罗、塞布特罗、莱克多巴胺、克仑特罗、漠布 特罗、苯氧丙酚胺、马布特罗、马责特罗、溴代克仑特罗残留量的检验。 本方法中沙丁胺醇、特布他林、塞曼特罗、塞布特罗、莱克多巴胺、克仑特罗、溴布特罗、苯氧内酚胺、 马布特罗、马责特罗、溴代克仑特罗的检出限均为0.5μg/kg。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682—2008，ISO3696：1987，MOD） 3原理 试样中的残留物经酶解，用高氯酸调节pH值，沉淀蛋白后离心，上清液用异丙醇-乙酸乙酯提取， 再用阳离子交换柱净化，液相色谱-串联质谱法测定，内标法定量。 4试剂和材料 除另有规定外，所有试剂均为分析纯，试验用水应符合GB/T6682一级水的标准。 4.1甲醇：液相色谱纯。 4.2乙酸钠(CH;COONa·3H2O)。 4.3 0.2mol/L乙酸钠缓冲液：称取13.6g乙酸钠，溶解于500mL水中，用适量乙酸调节pH至5.2。 4.4 高氯酸：70%~72%。 4.5 0.1mol/L高氯酸：移取8.7mL高氯酸，用水稀释至1000mL。 4.6 氢氧化钠。 4.7 10mol/L氢氧化钠溶液：称取40g氢氧化钠，用适量水溶解冷却后，用水稀释至100mL。 4.8 饱和氯化钠溶液。 4. 9 异丙醇-乙酸乙酯：（6十4，体积比）。 4.10甲酸水溶液：2%。 4.11 氨水甲醇溶液：5%。 4.120.1%甲酸水溶液-甲醇溶液：（95十5，体积比）。 β-葡萄糖醛武酶/芳基硫酸酯酶（β-Glucuronidase/arylsulfatase）：1oo00units/mg。 4. 13 4.14OasisMCX阳离子交换柱：60mg/3mL，使用前依次用3mL甲醇和3mL水活化。 注：OasisMCX阳离子交换柱是由Waters公司提供的产品的商品名。给出这一信息是为了方便本标准的使用者， 并不表示对该产品的认可。如果其他产品能有相同的效果，则可使用这些等效的产品。 1 GB/T222862008 4.15沙丁胺醇（CAS:18559-94-9）、特布他林半硫酸盐（CAS:23031-32-5）、塞曼特罗（CAS:54239-37-1）、 塞布特罗（CAS：54239-37-1）、莱克多巴胺盐酸盐（CAS：90274-24-1）、克仑特罗盐酸盐（CAS：37148-27-9）、溴 布特罗（CAS：41937-02-4）、苯氧丙酚胺盐酸盐（CAS：579-56-6）、马布特罗（CAS：54240-36-7）、马贡特罗 （CAS：95656-68-1）、漠代克仑特罗（CAS：37153-52-9）标准品：纯度大于98%。 4.16标准储备溶液：准确称取适量的沙丁胺醇、特布他林、塞曼特罗、塞布特罗、莱克多巴胺、克仑特 罗、溴布特罗、苯氧丙酚胺、马布特罗、马宽特罗、溴代克仑特罗标准品，用甲醇分别配制成100μg/mL 的标准贮备液，保存于一18℃冰箱内，可使用1年 4.17混合标准储备溶液（1μg/mL）：分别准确吸取1.00mL沙丁胺醇、特布他林、塞曼特罗、塞布特 罗、莱克多巴胺、克仑特罗、溴布特罗、苯氧丙酚胺、马布特罗、马责特罗、溴代克仑特罗至100mL容量 瓶中，用甲醇稀释至刻度，一18℃避光保存。 4.18同位素内标物：克仑特罗-D9，沙丁胺醇-D3,纯度大于98%。 4.19同位素内标储备溶液：准确称取适量的克仑特罗-D9、沙丁胺醇-D3，用甲醇配制成100μg/mL的 标准贮备液，保存于一18℃冰箱内，可使用1年。 4.20同位素内标工作溶液（10ng/mL）：将上述同位素内标储备溶液用甲醇进行适当稀释。 5仪器和设备 5.17 高效液相色谱-串联质谱联用仪：配有电喷雾离子源（ESI）。 5.2均质器。 5.3旋涡混合器。 5.4 离心机：5000r/min和15000r/min。 5.5 氮吹仪。 5.6水平振荡器。 5.7 真空过柱装置。 5.8 pH计。 5.9超声波发生器。 6样品制备 6.1提取 称取2g（精确到0.01g)经捣碎的样品于50mL离心管中，加入8mL乙酸钠缓冲液，充分混匀，再 加50μLβ-葡萄糖醛武酶/芳基硫酸酯酶，混匀后，37℃水浴水解12h。 添加100μL10ng/mL的内标工作液于待测样品中。加盖置于水平振荡器振荡15min，离心10min （5000r/min），取4mL上清液加人0.1mol/L高氯酸溶液5mL，混合均匀，用高氯酸调节pH值到1士0.3。 调节pH值到11。加10mL饱和氯化钠溶液和10mL异丙醇-乙酸乙酯（6十4）混合溶液，充分提取，在 5000r/min下离心10min。 转移全部有机相，在40℃水浴下用氮气将其吹干。加入5mL乙酸钠缓冲液，超声混匀，使残渣充 分溶解后备用。 6.2净化 将阳离子交换小柱连接到真空过柱装置。将上述残渣溶液上柱，依次用2mL水、2mL2%甲酸水 速控制在0.5mL/min。洗脱液在40℃水浴下氮气吹干。 15000r/min离心10min。 2 GB/T22286—2008 上清液供液相色谱串联质谱测定。 液相串联质谱测定 7. 1 液相色谱-串联质谱条件 a) 色谱柱：WatersATLANTICSCis柱,150mmX2.1mm(内径),粒度5μm; b) 流动相：A：0.1%甲酸/水，B:0.1%甲酸/乙腈，梯度淋洗见表1； 表1梯度淋洗表 时间/min A/% B/ % 0 96 4. 2 96 4 8 20 80 21 77 23 22 5 95 25 5 95 25.5 96 4 流速：0.2mL/min； c) d) 柱温：30℃； e) 进样量：20μL； f) 离子源：电喷雾（ESI），正离子模式； g) 扫描方式：多反应监测（MRM）； h) 脱溶剂气、锥孔气、碰撞气均为高纯氮气或其他合适的高纯气体；使用前应调节各气体流量以 使质谱灵敏度达到检测要求； i) 毛细管电压、锥孔电压、碰撞能量等电压值应优化至最优灵敏度； i) 监测离子：监测离子见表2。 表 2 被测物的母离子和离子参数表 子离子 定量子离子 母离子 定量子离子 母离子 子离子 被测物 被测物 (m/z) (m/z2) (m/z) (z/u) (z/u) (m/z) 沙丁胺醇 240 148、222 148 特布他林 226 152、125 152 塞曼特罗 202 160,143 160 塞布特罗 234 160,143 160 莱克多巴胺 302 164,284 164 克仑特罗 277 203、259 203 溴代克仑特罗 323 249,168 249 溴布特罗 367 293.349 293 苯氧丙酚胺 302 150.284 150 马布特罗 311 237、293 237 马责特罗 325 237、217 237 克仑特罗-D9 286 204 204 沙丁胺醇-D3 243 151 151 注：方法中所列色谱柱仅供参考，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对该产品的认可。如果其他 产品能有相同的效果，则可使用这些等效的产品。 7.2 液相色谱-串联质谱测定 按照6.1液相色谱-串联质谱条件测定样品和混合标准工作溶液，以色谱峰面积按内标法定量。在 上述色谱条件下沙丁胺醇、特布他林、塞曼特罗、塞布特罗、莱克多巴胺、克仑特罗、溴代克仑特罗、溴布 特罗、苯氧丙酚胺、马布特罗、马责特罗和同位素内标沙丁胺醇-D3、克仑特罗-D9的参考保留时间分别 3