ICS 71.100.70 Y 42 中华人民共和国国家标准 GB/T 37628—2019 化妆品中黄芪甲苷、芍药苷、连翘苷和 连翘酯苷A的测定 高效液相色谱法 Determination of astragaloside,paeoniflorin,forsythin and forsythoside A in cosmeticsHigh performance liquid chromatography 2019-06-04发布 2020-01-01实施 国家市场监督管理总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T 37628—2019 前言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草 本标准由全国香料香精化妆品标准化技术委员会（SAC/TC257)归口。 本标准起草单位：河北省食品检验研究院（国家果类及农副加工产品质量监督检验中心）、苏州世谱 检测技术有限公司、上海市日用化学工业研究所。 本标准主要起草人：张岩、李挥、曹梅荣、孙文毅、吴春敏、赵晓雅、刘亮、刘红冉、孟志娟、王娟、王岩、 张春林、代丹。 1 GB/T37628—2019 化妆品中黄芪甲首、芍药首、莲翘首和 连翘酯苷A的测定 高效液相色谱法 1范围 本标准规定了化妆品中黄芪甲苷、苟药苷、连翘苷和连翘酯苷A含量的高效液相色谱的定性定量 检测方法的原理、设备和材料、分析步骤、结果计算、回收率和精密度、允许差等内容 本标准适用于水剂、乳液、膏霜中黄芪甲苷、苟药苷、连翘苷和连翘酯苷A含量的测定。 本标准方法对于黄芪甲苷的检出限为15mg/kg，定量限为45mg/kg；芍药苷的检出限为3mg/kg，定 量限为8mg/kg；连翘苷和连翘酯苷A的检出限为20mg/kg，定量限为60mg/kg 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3黄芪甲苷 3.1原理 黄芪甲苷用热水溶解后经水饱和的正丁醇提取，氨试液洗涤，C1s固相萃取柱净化，高效液相色谱仪 分离，蒸发光散射检测器测定，外标法定量。 3.2试剂和材料 除另有规定外，所用试剂均为色谱纯，水为GB/T6682规定的一级水。 3.2.1甲醇。 3.2.220%甲醇溶液：量取甲醇（3.2.1)20mL与80mL水混合 3.2.3正丁醇：分析纯。 3.2.4乙腈。 3.2.5氨水。 3.2.6氨试液：取氨水（3.2.5）400mL，用去离子水定容至1L。 3.2.7黄芪甲苷标准物质：纯度不小于96%。黄芪甲苷的中英文名称、CAS号、分子式、相对分子质量 和结构式参见附录A中表A.1。 3.2.8黄芪甲苷标准工作溶液：准确称取100mg黄芪甲苷标准物质（3.2.7）（精确到0.1mg）置于 100mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，配制成浓度为1000mg/L的黄芪甲苷标准储备溶液，于4℃避 光保存，有效期2个月。分别精确移取黄芪甲苷标准储备溶液2mL3mL、4mL、5mL、10mL、50mL 于100mL棕色容量瓶后，用甲醇定容至刻度，配制质量浓度分别为20mg/L、30mg/L、40mg/L 50mg/L、100mg/L、500mg/L的黄芪甲苷标准工作溶液，于4℃避光保存，可使用一周。 3.2.9Cis固相萃取柱：200mg3mL。 1 GB/T37628—2019 3.2.10 微孔滤膜：0.45um，有机相。 3.3 仪器和设备 3.3.1 高效液相色谱仪：配蒸发光散射检测器。 3.3.2 分析天平：感量0.001g和0.0001g。 3.3.3高速冷冻离心机。 3.3.4具塞锥形瓶：250mL。 3.4 分析步骤 3.4.1 样品处理 3.4.1.1提取 称取2.5g样品（准确至0.001g）置于具塞锥形瓶（3.3.4)中，加入50mL热水（50℃土5℃），振摇 氨试液（3.2.6）洗涤3次（加入氨试液是为除去含酚羟基的成分和其他酸性干扰物质），每次40mL，弃 去氨液，回收正丁醇至干（减压浓缩至干），残渣加水10mL复溶。 3.4.1.2净化 Cls固相萃取柱（3.2.9）依次用5mL甲醇（3.2.1)和5mL水预处理，取黄芪甲苷水复溶液过固相萃 取柱，先用3mL去离子水洗涤，然后用20%甲醇溶液（3.2.2)5mL洗涤，弃去洗涤液。用甲醇（3.2.1） 20mL洗脱，收集洗脱液，洗脱液挥干溶剂，用甲醇（3.2.1）定容至5mL，取1mL过微孔滤膜（3.2.10） 待测。 3.4.2测定条件 高效液相色谱条件如下： 色谱柱：ODSCls（150mm×4.6mm，5μm）；或相当者； b) 流动相：乙睛（3.2.4）-水（32十68，体积比）； c） 柱温：30℃； d) 流速：1mL/min; e） 进样量：20uL； f) 蒸发光散射检测条件：漂移管温度：60℃；载气流量：1.8mL/min；放大系数：2 3.4.3标准曲线的绘制 黄芪甲苷标准工作溶液（3.2.8)按照浓度由低到高顺序进行测定。以进样质量的常用对数值为横 坐标，峰面积的常用对数值为纵坐标进行线性回归，得到标准曲线。 3.4.4测定 按照3.4.2的测定条件对待测物进行测定，用外标法定量。待测液中黄芪甲苷的响应值应在标准 曲线的线性范围内，超过线性范围则应稀释后再进样测定。根据保留时间定性，根据峰面积进行定量。 黄芪甲苷标准物质的液相色谱图参见附录B中图B.1。 3.4.5空白试验 除不称取样品外，均按上述测定条件和步骤进行 2 GB/T 37628—2019 3.5结果计算 分析结果按式(1)计算： cXV :(1) m 式中： 化妆品中黄芪甲苷的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）； m 测定成分黄芪甲苷质量浓度，单位为毫克每升（mg/L）； C V一样品定容体积，单位为毫升（mL）； m- 样品取样量，单位为克（g）。 3.6回收率和精密度 添加水平50mg/kg~500mg/kg范围时，黄芪甲昔的回收率在80.8%~98.2%之间，相对标准偏 差小于10%。 3.7允许差 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。 4芍药苷 4.1原理 药苷经甲醇超声提取，高效液相色谱仪分离，紫外检测器检测，外标法定量。 4.2试剂和材料 除另有规定外，所用试剂均为色谱纯，水为GB/T6682规定的一级水。 4.2.1甲醇。 4.2.2乙腈。 4.2.30.1%磷酸水溶液：取1mL磷酸（分析纯）于1L容量瓶中，用去离子水定容至刻度，过0.45μm 滤膜。 4.2.4芍药苷标准物质：纯度不小于96%。芍药苷的中英文名称、CAS号、分子式、相对分子质量和结 构式参见表A.1。 4.2.5苟药苷标准工作溶液：准确称取100mg药苷标准物质（4.2.4）（精确到0.1mg）置于100mL 容量瓶中，用甲醇定容至刻度，配制成浓度为1000mg/L的芍药苷标准储备溶液，于4℃避光保存，有 效期2个月。分别精确移取标准储备溶液0.1mL0.3mL、1.2mL、3mL,6mL、12mL于100mL棕 色容量瓶后，用甲醇定容至刻度，配制成浓度分别为1mg/L、3mg/L、12mg/L30.mg/L、60mg/L和 120mg/L的药苷标准工作溶液，于4℃避光保存，可使用一周。 4.2.6微孔滤膜：0.45μm，有机相。 4.3仪器和设备 4.3.1高效液相色谱仪：配紫外检测器（或等效检测器）。 4.3.2分析天平：感量0.001g和0.0001g。 4.3.3 超声波清洗器。 4.3.4 具塞离心管：50mL。 3