ICS 11.220 CCS B 41 中华人民共和国国家标准 GB/T 23197—2022 代替GB/T23197—2008 鸡传染性支气管炎诊断技术 Diagnostic techniques for avian infectious bronchitis 2023-07-01实施 2022-12-30发布 国家市场监督管理总局 发布 国家标准化管理委员会 GB/T23197—2022 目 次 前言 引言 1 范围 规范性引用文件 3 术语和定义 缩略语 4 临床诊断 6 样品采集、保存与运输 病毒分离与鉴定 8 病毒 RT-PCR 病毒实时荧光RT-PCR 10 病毒基因型鉴定· 11 血凝及血凝抑制试验 12气管环组织培养血清中和试验 13综合判定 10 附录A（规范性）常用试剂溶液配制 L2 附录B（资料性）RT-PCR溶液的配制 14 附录C（资料性） 鸡传染性支气管炎病毒RT-PCR检测结果参照图 16 附录D（资料性） 鸡传染性支气管炎病毒实时荧光RT-PCR检测结果参照图 17 附录E（资料性）Reed-Muench法计算TOC-IDs和血清中和效价 18 GB/T23197—2022 前言 起草。 本文件代替GB/T23197—2008《鸡传染性支气管炎诊断技术》，与GB/T23197—2008相比，除结 构调整和编辑性改动外，主要技术变化如下： 更改了“临床诊断”（见第5章，2008年版的第2章）； 增加了“样品采集”和"样品处理”（见6.3和6.5）； 一更改了病毒分离与鉴定”（见第7章，2008年版的第3章）； 更改了“病毒RT-PCR”，更新了检测引物（见8.3，2008年版的第4章）； 增加了“病毒实时荧光RT-PCR”（见第9章）； 一增加了“病毒基因型鉴定”（见第10章）； 一更改了“血凝及血凝抑制试验”（见第11章，2008年版的第5章）； 更改了“气管环组织培养血清中和试验”（见第12章，2008年版的第6章）。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由中华人民共和国农业农村部提出。 本文件由全国动物卫生标准化技术委员会（SAC/TC181）归口。 本文件起草单位：中国动物卫生与流行病学中心、青岛农业大学、中国农业科学院哈尔滨兽医研究 所、临胸县畜牧业发展中心。 本文件主要起草人：龚振华、王建琳、王凯、王楷成、牟瑞营、王艳波、张云香、王晓颖、王丽萍、 王素春、苏红、庞素芬、刘坤、谭刘刚、韩宗玺、吴延功、刘胜旺。 本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为： 2008年首次发布为GB/T23197一2008； 一本次为第一次修订。 GB/T23197—2022 引言 鸡传染性支气管炎（infectiousbronchitis，IB）由鸡传染性支气管炎病毒（infectiousbronchitis virus，IBV)引起，是鸡的一种急性、高度接触性传染病。IB可以发生于各种日龄的鸡，5周龄以内的鸡 尤其易感，且症状较明显。IB的临床特征主要表现为病鸡呼吸困难、有啰音、咳嗽、打喷嚏；产蛋量降 低、蛋的品质下降；雍鸡出现死亡。IB广泛流行于世界各地，严重危害养鸡业生产。 IBV在分类上属于冠状病毒科、冠状病毒亚科、Y病毒属，是一种单股正链RNA病毒，其RNA易 于变异，IBV具有多样性。多数IBV毒株能使气管产生特异性病变，但有些毒株能引起肾脏病变和生 殖道病变。目前国内外已经分离出的IBV毒株分属30多个血清型，各血清型IBV毒株间的交叉免疫 保护力低。 IB的诊断主要通过病原学和血清学试验进行。因生产上广泛采用IBV活毒株疫苗预防本病，这在 临床上增加了诊断IB的难度。 本文件规范了IB的临床诊断技术；规范了IB的病原学诊断技术，包括病毒分离与鉴定、病毒RT 验、气管环组织培养血清中和试验。这些诊断技术也是《OIE陆生动物诊断试验与疫苗手册》推荐的诊 断IB的技术，本次修订过程中，对于该手册所推荐的相关诊断技术均有借鉴。 Ⅱ GB/T23197—2022 鸡传染性支气管炎诊断技术 1范围 本文件规定了鸡传染性支气管炎（IB)的临床诊断、病毒分离与鉴定、病毒RT-PCR、病毒实时荧光 RT-PCR、病毒基因型鉴定、血凝及血凝抑制试验、气管环组织培养血清中和试验的技术要求 本文件适用于IB的诊断、检疫、监测和流行病学调查。 2规范性引用文件 2 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款，其中，注日期的引用文 本文件。 GB19489 实验室生物安全通用要求 3 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 鸡传染性支气管炎 infectious bronchitis 由隶属于冠状病毒科、冠状病毒亚科、病毒属的鸡传染性支气管炎病毒引起的主要感染鸡的 疾病。 3.2 血凝hemagglutinin IBV毒株的培养液经胰酶消化处理后得到的抗原凝集鸡红细胞的过程。 注：通过选用适当IBV毒株，制备IBV血凝抗原，进行IB的血清学诊断。 3.3 hemagglutinininhibition 血凝抑制 IB抗体特异性地附着在IBV血凝抗原的特异位点上，干扰IBV血凝抗原与红细胞受体之间的结 合，抑制IBV血凝抗原凝集鸡红细胞的能力。 3.4 Ct 值 cycle threshold 每个实时荧光RT-PCR反应管内的荧光信号量达到设定的阈值所经历的循环次数。 4缩略语 4 下列缩略语适用于本文件。 HI:血凝抑制(Hemagglutinin Inhibition) IB：鸡传染性支气管炎（InfectiousBronchitis） 1