ICS 65.120 CCS B 46 中华人民共和国国家标准 GB/T 17814—2022 代替GB/T17814—2011 饲料中丁基羟基茴香醚、二丁基羟基甲苯、 特丁基对苯二酚、乙氧基喹嘛和没食子酸 丙酯的测定 Determination of butyl hydroxy anisole,dibutyl hydroxy toluene tertiary butyl hydroquinone,ethoxyquin and propyl gallate in feeds 2023-07-01实施 2022-12-30发布 国家市场监督管理总局 发布 国家标准化管理委员会 GB/T17814—2022 前言 本文件按照GB/T1.1一2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 酯的测定》，与GB/T17814一2011相比，除结构调整和编辑性改动外，主要技术变化如下： a）将高效液相色谱法适用范围扩大至精料补充料、饲料原料（见第1章，2011年版的第1章）； b) 更改了高效液相色谱法测定丁基羟基茴香醚、二丁基羟基甲苯、乙氧基喹啉、没食子酸丙酯的 基对苯二酚和气相色谱法测定丁基羟基茴香醚、二丁基羟基甲苯和乙氧基喹啉的检出限和定 量限（见第1章和附录A）； 增加了高效液相色谱法测定特丁基对苯二酚（见第4章）； c） d）增加了油脂类试样溶液的制备（见4.5.1.1)； e）+ 删除了气相色谱法中填充柱法（见2011年版的4.2.4.1.2）。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由全国饲料工业标准化技术委员会（SAC/TC76）提出并归口。 本文件起草单位：上海市动物疫病预防控制中心、中国农业科学院农业质量标准与检测技术研 究院。 本文件主要起草人：商军、黄士新、张浩然、曹莹、宋荣、田恺、华贤辉、黄家莺、徐汀、孙冰清、姜芹、 张亦菲、张妤。 本文件于1999年首次发布，2011年第一次修订，本次为第二次修订。 1 GB/T17814—2022 饲料中丁基羟基香醚、二丁基羟基甲苯、 特丁基对苯二酚、乙氧基喹嘛和没食子酸 内丙酯的测定 1范围 本文件描述了饲料中丁基羟基茴香醚（BHA）、二丁基羟基甲苯（BHT)、特丁基对苯二酚（TBHQ）、 乙氧基喹啉（EQ)和没食子酸丙酯（PG)的高效液相色谱测定方法以及饲料中BHA、BHT、EQ的气相 色谱测定方法。 本文件中“高效液相色谱法”适用于配合饲料、浓缩饲料、精料补充料、复合预混合饲料、维生素预混 中BHA、BHT和EQ含量的测定。 本文件中BHA、BHT、TBHQ、EQ和PG的检出限、定量限按附录A执行。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文 本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T20195动物饲料试样的制备 3术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4高效液相色谱法（仲裁法） 注意：测定全过程，尽可能避光（或不在强光下）操作。 4.1原理 试样中的BHA、BHT、TBHQ、EQ和PG用乙睛超声提取，高效液相色谱法测定，外标法定量。 4.2试剂或材料 除非另有规定，仅使用分析纯试剂。 4.2.1水：GB/T6682，一级。 4.2.2乙睛：色谱纯。 4.2.3乙酸：色谱纯。 4.2.42%乙酸溶液：准确移取20mL乙酸（4.2.3），加水稀释至1000mL，摇匀。 1 GB/T17814—2022 4.2.5标准品：BHA、BHT、TBHQ、PG纯度均不小于98%，EQ纯度不小于95%，具体信息见附录B。 4.2.6混合标准储备溶液：分别称取BHA、BHT、TBHQ、EQ100mg和PG50mg（精确至0.01mg）于 100mL棕色容量瓶中，用乙腈（4.2.2)溶解并定容。于2℃～8℃避光保存，有效期为2周。 4.2.7混合标准中间溶液：准确移取混合标准储备溶液（4.2.6)20mL于200mL棕色容量瓶中，用乙睛 (4.2.2)定容，使PG浓度为0.05mg/mL,BHA、BHT、TBHQ、EQ浓度为0.1mg/mL。 8.00μg/mL、16.0μg/mL、20.0μg/mL和25.0μg/mL;BHA、BHT、TBHQ、EQ的质量浓度分别为 1.00μg/mL、4.00μg/mL8.00μg/mL16.0μg/mL32.0μg/mL、40.0μg/mL和50.0μg/mL。临用 现配。 4.2.9针式滤器：0.45um，有机相。 4.2.10微孔滤膜：0.22μm，有机相。 4.3 仪器设备 4.3.1 高效液相色谱仪：配有紫外检测器或二极管阵列检测器。 4.3.2 分析天平：感量0.01mg和1mg。 4.3.3 超声波清洗器。 4.3.4 恒温水浴锅。 4.3.5离心机：转速不低于9000r/min。 4.4样品 按GB/T20195制备试样，至少约200g，固体样品粉碎使其全部通过0.425mm孔径的分析筛，充 分混匀，立即装人密闭容器中，避光保存，备用。液体、膏状样品，立即装人密闭容器中，避光保存，备用。 4.5试验步骤 4.5.1试样溶液的制备 4.5.1.1油脂类试样 平行做两份试验。称取试样5g，精确至1mg，置于250mL具塞三角瓶中（如为凝固状，置65℃水 浴中加热7min，使融化），准确加入50mL乙睛，55℃超声提取40min。冷却至室温，取上层溶液20ml 于50mL离心管中，9000r/min离心5min（4.3.5），用针式滤器（4.2.9）过滤，滤液再经0.22μm滤膜 (4.2.10)过滤，备用。 4.5.1.2其他类试样 平行做两份试验。称取试样5g，精确至1mg，置于250mL具塞三角瓶中，准确加人乙睛（4.2.2） 50mL，摇匀，超声提取40min，期间振摇2次～3次。摇匀静置至室温。吸取上述提取液适量，用针式 滤器（4.2.9）过滤，滤液再经0.22μm滤膜（4.2.10）过滤，备用。 4.5.2液相色谱参考条件 液相色谱参考条件如下： a） 色谱柱：C18柱，长150mm，内径4.6mm，粒径5um，或性能相当者； b) 流动相：乙腈（4.2.2）+乙酸溶液（4.2.4）=65十35； c) 流速：0.5mL/min； 2 GB/T17814—2022 d）柱温：20℃~30℃； e) 进样量：20μL； 检测波长：280nm。 4.5.3测定 4.5.3.1标准系列溶液和试样溶液测定 在仪器的最佳条件下，分别取混合标准系列溶液（4.2.8）和试样溶液（4.5.1）上机测定。混合标准溶 液的液相色谱图见附录C。 4.5.3.2定性 以保留时间定性，试样溶液中待测物的保留时间应与质量浓度相近的混合标准系列溶液中BHA、 BHT、TBHQ、EQ及PG的保留时间一致，其相对偏差在士2.5%之内。 4.5.3.3定量 以BHA、BHT、TBHQ、EQ和PG的质量浓度为横坐标、色谱峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，其 相关系数应大于0.99。试样溶液（4.5.1）中待测物的质量浓度应在标准曲线的线性范围内。如超出范 围，应将试样溶液用乙睛（4.2.2）稀释后，重新测定。单点校准定量时，试样溶液中待测物的质量浓度与 标准溶液质量浓度相差不超过30%。 4.6试验数据处理 试样中待测物的含量以质量分数wi计，数值以毫克每千克（mg/kg）表示。多点校准按公式（1）计 算；单点校准按公式（2)计算。 :(1) m×1000 式中： p1i 从标准曲线查得的试样液中待测物的质量浓度，单位为微克每毫升（μg/mL)； Vi 试样溶液的体积，单位为毫升（mL）； n 上机测定的试样溶液中待测物的质量浓度超出线性范围后，进一步稀释的倍数； 1000 换算系数； m1 试样质量，单位为克（g）。 AiXpsliXViXn X1000 (2) AiXmX1000 式中： Ai 试样溶液中待测物的峰面积； 标准溶液中BHA、BHT、TBHQ、EQ及PG的质量浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）； psli A 试样溶液的体积，单位为毫升（mL）； n 上机测定的试样溶液中待测物的质量浓度超出线性范围后，进一步稀释的倍数； 1000 换算系数； Asli 标准溶液中BHA、BHT、TBHQ、EQ及PG的峰面积； 试样质量，单位为克（g）。 m1 测定结果以平行测定的算术平均值表示，保留3位有效数字。 4.7精密度 在重复性条件下，两次独立测定结果与其算数平均值的绝对差值不大于该算术平均值的5%。 3