ICS 71.100.70 Y 42 中华人民共和国国家标准 GB/T 35951—2018 化妆品中螺旋霉素等8种大环内酯类 抗生素的测定 液相色谱-串联质谱法 Determination of eight macrolide antibiotics such as spiramycin in cosmeticsLC-MS/MS 2018-02-06发布 2018-09-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T35951—2018 前言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准由中国轻工业联合会提出。 本标准由全国香料香精化妆品标准化技术委员会（SAC/TC257）归口。 本标准起草单位：苏州世谱检测技术有限公司、广东华鑫检测技术有限公司、江苏隆力奇生物科技 股份有限公司、上海市日用化学工业研究所、完美（中国）有限公司、欧诗漫生物股份有限公司、苏州质量 检测科学研究院、河北省食品检验研究院、江苏省食品药品监督检验研究院、江苏省产品质量监督检验 研究院、苏州大学、苏州赛分科技有限公司。 本标准主要起草人：车文军、杨洋、沈敏、代丹、周建青、张丽华、李晓敏、陆小宇、杨安全、范素芳、 方萍、袁利文、刘园、李海、廖华勇、康薇、王小丹、张征、张岩、武中平、卢剑、李建祥、黄学英。 GB/T35951—2018 引 本标准的被测物质是我国《化妆品安全技术规范（2015年版）》规定的禁用物质 禁用物质是指不能作为化妆品生产原料即组分添加到化妆品中的物质。《化妆品安全技术规范 （2015年版）》规定：若技术上无法避免禁用物质作为杂质带人化妆品时，应进行安全性风险评估，确保 在正常、合理及可预见的使用条件下不得对人体健康产生危害， 目前我国尚未规定这些物质的限量值，本标准的制定，仅对化妆品中测定这些物质提供检测方法。 Ⅱ GB/T35951—2018 化妆品中螺旋霉素等8种大环内酯类 抗生素的测定 液相色谱-串联质谱法 1范围 本标准规定了化妆品中螺旋霉素、阿奇霉素、替米考星、竹桃霉素、红霉素、泰乐菌素、克拉霉素、罗 红霉素含量的液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）测定方法的试验方法、结果计算、回收率与精密度、充许 差等内容。 本标准适用于膏霜乳液、水剂类化妆品中螺旋霉素、阿奇霉素、替米考星、竹桃霉素、红霉素、泰乐菌 素、克拉霉素、罗红霉素含量的测定。 本标准方法检出限与定量限参见附录A中的表A.1。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3试验方法 3.1原理 样品经提取液超声提取、离心后，经固相萃取小柱净化，用液相色谱-串联质谱法测定和确证，外标 法定量。 3.2试剂和材料 除非另有说明，所有试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。 3.2.1甲醇：色谱纯。 3.2.2乙腈：色谱纯。 3.2.3甲酸：色谱纯。 3.2.4正已烷：色谱纯 3.2.5氢氧化钠。 3.2.6磷酸二氢钠。 3.2.70.1mol/L氢氧化钠溶液：称取4.0g氢氧化钠，并用水稀释至1L。 3.2.8甲醇水溶液（3+7）：量取30mL甲醇（3.2.1)与70mL水混合。 3.2.9乙腈水溶液（2十8）：量取20mL乙腈（3.2.2）与80mL水混合。 3.2.10 磷酸盐缓冲溶液（0.1mol/L）：溶解12.2g磷酸二氢钠于950mL水中，用0.1mol/L氢氧化钠 溶液调节pH值至8.0,最后用水稀释至1L。 3.2.118种大环内酯抗生素标准样品/物质：纯度均不小于96%。螺旋霉素、阿奇霉素、替米考星、竹 桃霉素、红霉素、泰乐菌素、克拉霉素、罗红霉素的药物名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子 1 GB/T35951—2018 质量及结构式参见附录B中的表B.1。 3.2.12标准储备溶液：准确称取适量各标准物质（3.2.11）分别置于50mL容量瓶中，用甲醇定容至刻 度，配制成浓度为500mg/L的储备液，冷藏避光保存，有效期为一个月。 3.2.13混合标准储备溶液：分别准确移取阿奇霉素、竹桃霉素、红霉素、泰乐菌素、克拉霉素、罗红霉素 标准储备溶液（3.2.12)0.2mL和螺旋霉素、替米考星标准储备溶液（3.2.12)6.0mL于100mL容量瓶 中，用甲醇定容至刻度，配制成阿奇霉素、竹桃霉素、红霉素、泰乐菌素、克拉霉素、罗红霉素浓度为 1mg/L，螺旋霉素、替米考星浓度为30mg/L的混合标准储备溶液，临用前现配 3.2.14OasisHLB固相萃取柱或相当者：200mg，3mL。使用前依次用5mL甲醇，5mL水活化。 3.2.15微孔滤膜：0.22μm，有机相。 3.3 仪器和设备 3.3.1 液相色谱-串联质谱仪（LC-MS/MS）：配有电喷雾离子源（ESI）。 电子天平：感量为0.0001g和0.01g。 3.3.2 3.3.3 离心机：转速不低于6000r/min。 3.3.4 超声波清洗机。 3.3.5 固相萃取装置。 3.3.6 氮气吹干仪。 3.3.7 涡旋混合器。 3.3.8具塞塑料离心管：15mL。 3.4 试样制备 3.4.1提取 3.4.1.1膏霜乳液类化妆品（水包油） 称取试样约0.2g（精确至0.0001g）于15mL具塞塑料离心管中，准确加人10mL甲醇（3.2.1）， 涡旋分散均勾后，超声提取15min，以6000r/min离心10min，移取5.0mL上清液，加15mL磷酸盐 缓冲溶液（3.2.10）混匀后，待净化 3.4.1.2膏霜乳液类化妆品（油包水） 均匀后，准确加人10mL磷酸盐缓冲溶液（3.2.10），超声提取15min，以6000r/min离心10min，弃去 上层正已烷后，移取5.0mL下层清液，加5mL磷酸盐缓冲溶液（3.2.10）混勾后，待净化 3.4.1.3水剂类化妆品 称取试样约0.2g（精确至0.0001g）于15mL具塞塑料离心管中，用磷酸盐缓冲溶液（3.2.10）定容 3.4.2净化 将试样提取液转移至固相萃取小柱（3.2.14）中，依次用5mL水，5mL甲醇水溶液（3.2.8）淋洗， 弃去流出液，减压抽干后，用5mL甲醇（3.2.1）洗脱，收集洗脱液。在40℃水浴中用氮气吹至近干， 加人1.0mL乙睛水溶液（3.2.9），在涡旋混合器上混合1min后，过微孔滤膜（3.2.15）后滤液待测。 2