ICS 07.080 CCS C 27 中华人民共和国国家标准 GB/T 41799—2022 限制性核酸内切酶杂质检测方法 Assay method of restriction endonuclease impurity 2023-05-01实施 2022-10-12发布 国家市场监督管理总局 发布 国家标准化管理委员会 GB/T 41799—2022 目 次 前言 II 引言 IV 范围 1 2 规范性引用文件 3术语和定义 4 原理 5试剂或材料 6仪器设备 试验步骤 7 附录A（规范性）琼脂糖凝胶电泳 GB/T41799—2022 前言 本文件按照GB/T1.1一2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由全国工具酶标准化工作组（SAC/SWG11)提出并归口。 本文件起草单位：福建南生科技有限公司、通用生物（安徽）股份有限公司、夏禾（深圳）生物技术有 限公司、厦门银祥集团有限公司、苏州坤琪生物科技有限公司、厦门中集信检测技术有限公司、上海鹰姿 生命科技有限公司、雷谷（厦门）生物医药有限公司、北京化工大学、山东大学、安琪酵母股份有限公司、 复旦大学、武汉科技大学、北京中天标科标准化技术研究院有限公司、厦门艾德生物医药科技股份有限 公司。 本文件主要起草人：黄发灿、雍金贵、郑登忠、张志刚、陈劲春、陈秀兰、江锋、赵毅、钟江、朱力、姚娟、 杨忠华、李超、许文来、王永成。 GB/T41799—2022 引 限制性核酸内切酶是一类识别双链DNA中特定核苷酸序列的DNA水解酶，以内切方式水解 DNA,产生5'-PO3和3'-OH末端。限制性核酸内切酶的作用底物是脱氧核糖核酸（DNA）,其他核酸 内切酶或核酸外切酶的污染会导致底物的降解或消失，降低其他核酸内切酶或核酸外切酶的污染是限 制性核酸内切酶最重要的质量保证。制定限制性核酸内切酶杂质检测方法国家标准，用以推动该类工 IV GB/T41799—2022 限制性核酸内切酶杂质检测方法 1范围 本文件描述了限制性核酸内切酶中污染其他核酸内切酶或核酸外切酶等杂质的检测方法。 本文件适用于限制性核酸内切酶杂质的检测。 2规范性引用文件 2 本文件没有规范性引用文件。 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 限制性核酸内切酶 restriction endonuclease 以内切方式水解DNA，产生5'-PO：和3-OH未端，识别双链DNA中特定核苷酸序列的DNA水 解酶。 3.2 杂质impurity 影响核酸底物存在的其他核酸内切酶和核酸外切酶。 4原理 由于ΦX174DNA无BamHI酶切位点，入DNA有5个BamHI酶切位点，完全酶解后产生6条谱 带，它们的大小及核苷酸顺序均为已知。样品中无其他核酸内切酶污染，酶解产物在电泳板上形成的谱 带与酶解时间过长、用过多无关 由于BamHI切开DNA双链产生一对黏性末端，其各有5个碱基失去互补碱基形成突出单链，其 易受核酸外切酶作用丢失若干个碱基乃至形成平末端；如果将此DNA连接后再用BamHI酶切，结果 是无法切开。如果该位点是在外显子区或编码区，即意味其对应的氨基酸序列发生变化，乃至某些生物 性状发生改变。例如质粒pBR322所含BamHI识别位点是在其抗四环素基因上，如果使用被核酸外 切酶污染的样品BamHI过量长时程切割pBR322，然后再连接闭环后重新转化受体菌，该菌在含四环 素培养基上无法生长，而没有这样酶切的pBR322转化菌能够生长。又如质粒pUC19所含BamHI位 点居于编码LacZ的α互补肽上，若发生前述状况，就会导致该肽链的氨基酸序列变化，最终在含 IPTG和X-gal的LB培养基上由原本是蓝斑变成白斑。如果白斑数目占到总菌斑数的10%以上，就判 定该样品已有核酸外切酶污染。 5试剂或材料 5 5.1入噬菌体脱氧核糖核酸（入DNA）。 1