ICS 67.050 B 04 GB 中华人民共和国国家标准 GB/T 19495.82004 转基因产品检测 蛋白质检测方法 Detection of genetically modified plants and derived products- Protein based methods 2004-04-13发布 2004-04-13实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T19495.8—2004 目 次 前言 范围 规范性引用文件 3 术语和定义 4 原理 5 试剂 6 仪器设备 取样 程序 9 结果的分析与表述 10 影响检测结果的参数· 11 验证方法· 12检测报告 附录A（规范性附录）转基因植物及其产品中CP4EPSPS蛋白的ELISA检测 附录B(规范性附录）转基因植物及其产品中Cry1Ab/Ac蛋白的试纸条检测.. 10 参考文献 GB/T19495.8—2004 前 #言 GB/I19495《转基因产品检测》为系列标准： GB/T19495.1—2004 转基因产品检测 通用要求和定义； GB/T19495.22004 转基因产品检测 实验室技术要求； GB/T19495.3—2004 转基因产品检测 核酸提取纯化方法； GB/T19495.4—2004 转基因产品检测 核酸定性PCR检测方法； ——GB/T19495.5—2004 转基因产品检测 核酸定量PCR检测方法； GB/T19495.6—2004 转基因产品检测 基因芯片检测方法； GB/T19495.7—2004 转基因产品检测 抽样和制样方法； GB/T 19495.82004 转基因产品检测 蛋白质检测方法。 本部分附录A、附录B为规范性附录。 本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本部分由中华人民共和国质量监督检验检疫总局批准发布。 本部分起草单位：上海市农业科学院、中国农业大学、中国农业科学院生物技术研究所、农业部科技 发展中心、国家质量监督检验检疫总局动植物检疫实验所、上海交通大学、中华人民共和国上海出人境 检验检疫局、华南农业大学。 本部分主要起草人：张大兵、黄昆仑、陆伟、潘爱虎、付仲文、朱水芳、梁婉琪、贾军伟、潘良文、 梅曼彤 本部分系首次发布的国家标准。 1 GB/T19495.8—2004 转基因产品检测 蛋白质检测方法 1范围 GB/T19495的本部分适用于以检测目标蛋白为基础的转基因产品定性定量检测方法 本部分附录中列出的检测方法是以现有抗体为基础的检测方法。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过GB/T19495的本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文 件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成 协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本 部分。 GB/T19495.12004转基因产品检测 通用要求和定义 GB/T19495.2—2004转基因产品检测实验室技术要求 GB/T19495.7—2004转基因产品检测 抽样和制样方法 3术语和定义 下列术语和定义适用于GB/T19495的本部分。 3.1一般术语 3.1. 1 基质martix 测试样品中包含被溶解或固定的目标蛋白的所有物质组分的混合物。 3.1.2 蛋白质变性denaturationof proteins 由于物理或化学等处理使目标蛋白的结构受到破坏或修饰，其功能、酶学性质或抗原性发生改变 3.2与抗体有关的术语 3. 2. 1 抗体antibody B淋巴细胞对异源成分分子（抗原）反应时产生并分泌的免疫球蛋白，可与抗原特异性结合。 3.2.2 抗原antigen 被免疫系统识别、并可激发免疫系统产生免疫反应的物质。 3.2. 3 克隆clone 来源于二个单细胞系的相同细胞。 3.2.4 交叉反应 cross-reactivity 抗体与目标蛋白之外的其他物质结合的现象。 3.2. 5 单克隆抗体 monoclonal antibody 针对一个抗原决定簇、从一个杂交瘤细胞克隆产生的抗体 GB/T19495.8—2004 3.2. 6 多克隆抗体！ polyclonal antibody 针对多个抗原决定簇，由多个淋巴细胞克隆产生的抗体。 3.2.7 抗体特异性 specificity of an antibody 一种抗体可专一地与一个抗原决定簇结合而不与其他抗原决定簇结合的能力。 3.3目标蛋白为基础的检测技术有关术语 3. 3. 1 偶联抗体 conjugate antibody 与一个酶或荧光物质结合的抗体。 3.3.2 蛋白质免疫印迹 westernblotting 从聚丙烯酰胺凝胶上将经过电泳分离的蛋白质转移到固相介质上，目标蛋白可被标记抗体特异识 别的方法。 3.3. 3 酶联免疫吸附分析ELISAenzymelinked immunosorbentassay 利用酶联抗体和底物形成有颜色反应的产物的一种体外定量分析方法。 3.3.4 检测试剂盒 testkit 用于检测某一特定成分的一组试剂的组合体。 3.3.5 检测试纸条 dipstickformat 抗体或分析物包被在固相支持物表面，适合快速定性分析的侧向流动试纸条。 4原理 从测试样品中按照一定的程序抽提出含有目标蛋白的基质，利用抗体与目标蛋白（抗原）特异性结 合特性，通过偶联抗体与抗原抗体复合物的作用产生可检测的信号。 5试剂 除另有规定外，所有试剂的等级和要求应符合本部分的附录A、附录B和GB/T19495.2一2004中 的规定。如未明确规定的，试剂应是分子生物级的。所有试剂的储存和使用应符合供应商和实验室的 要求。 6仪器设备 6.1搅拌器。 6.2匀浆器。 6.3冷冻离心机(4000g～10 000g)。 6.4酶标仪。 7取样 按照GB/T19495.7—2004中的规定执行。 1）由指定单位提供，给出这一信息是为了方便本部分的使用者，并不表示对该产品的认可。如果其他等效产品具 有相同的效果，则可使用这些等效产品。 2