ICS 65.020.30 B 40 GB 中华人民共和国国家标准 GB/T20365—2006 硫酸软骨素和盐酸氨基葡萄糖 含量的测定 液相色谱法 Determination method for chondroitin sulfate and glucosamine hydrochloride- Liquid chromatography method 2006-05-25发布 2006-09-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T20365—2006 前言 本标准的附录A和附录B为资料性附录。 本标准由中华人民共和国山东出人境检验检疫局提出。 本标准由中华人民共和国山东出人境检验检疫局负责起草 本标准主要起草人：牛增元、王岩、孙忠松、袁玲玲、王境堂、纪雷 1 GB/T20365—2006 硫酸软骨素和盐酸氨基葡萄糖 含量的测定 液相色谱法 1范围 本标准规定了用液相色谱法测定硫酸软骨素和盐酸氨基葡萄糖含量的方法。 测定。 2规范性引用文件 下列标准文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后 研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682—1992，neqISO3696:1987) 3原理 用乙腈将硫酸软骨素样品分散均匀，以水溶解，经液相色谱分离后，在波长192nm测定，外标法 定量。 4试剂和材料 4.1水：GB/T6682规定的一级水。 4.2乙：液相色谱级。 4.3戊烷磺酸钠：纯度≥99.5%。 4.4 硫酸软骨素A标准品：纯度约70%，其余为硫酸软骨素C,结构式参见附录A。 4.5 硫酸软骨素B标准品：纯度约90%，其余为硫酸软骨素A和C，结构式参见附录A。 4.6 硫酸软骨素C标准品：纯度约90%，其余为硫酸软骨素A，结构式参见附录A。 4.7 盐酸氨基葡萄糖：纯度≥99.0%。 4.8标准溶液：称取25.0mg经105℃干燥4h的硫酸软骨素标准品A（或B,或C)和25.0mg盐酸氨 基葡萄糖于烧杯中，加人5.0mL乙睛，振荡使其分散均匀，再加入水，用超声波使其溶解，转移至 50mL容量瓶中，用水定容至刻度，硫酸软骨素浓度约为0.5mg/mL，盐酸氨基葡萄糖浓度约为 0.5 mg/mL 4.9戊烷磺酸钠溶液：称取0.87g戊烷磺酸钠溶液用500mL水溶解，该溶液的浓度为10mmol/L。 5仪器和设备 5.1超声波发生器。 5.2分析天平：感量为0.1mg。 5.3高效液相色谱仪：配有二极管阵列检测器或紫外检测器 5.4滤膜：聚四氟乙烯膜（PTFE)，0.2um。 GB/T20365—2006 6测定步骤 6.1样品溶液的制备 当样品是颗粒状态时，需要先将其在研钵中研细成粉末。 将粉末状样品在105C下干燥4h。称取25.0mg样品于50mL烧杯中，加入5.0mL乙晴，振荡 使其分散均匀，再加入水，用超声波使其溶解，转移至50mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀。用液相 色谱仪测定前，样品溶液用0.2μum滤膜过滤 6.2色谱条件 a）流动相：乙腈十戊烷磺酸钠溶液（10十90）； b)1 色谱柱：Cis（用极性小分子封尾），粒径5μm，柱长250mm，内径4.6mm； 注：可用NUCLEODURCisPyramid色谱柱，或其他相当者。 c） 流速：0.8mL/min； 检测波长：192nm； (P e) 进样体积：10μL。 6.3色谱测定 分别将标准溶液、样品溶液注入液相色谱仪进行测定，记录色谱峰面积。从牛软骨组织中提取的硫 酸软骨素样品使用硫酸软骨素A标准品，从猪软骨组织中提取的硫酸软骨素样品使用硫酸软骨素B标 准品，从鲨鱼软骨组织中提取的硫酸软骨素样品使用硫酸软骨素C标准品。标准溶液的典型色谱图参 见附录B。 7结果的计算 被测物的含量按式（1）计算： A,Xmis X100 W, = A.Xm 式中： Wi—样品中被测物的百分含量，%； A,—样品溶液中被测物的色谱峰面积； mig 标准溶液中被测物标准品的质量，单位为毫克（mg）； 标准溶液中被测物标准品的色谱峰面积； As m 样品的质量，单位为毫克（mg）。 8精密度 在重复性条件下，硫酸软骨素获得的两次独立测试结果的绝对差值不大于这两个测定值的算术平 均值的0.5%：盐酸氨基葡萄糖获得的两次独立测试结果的绝对差值不大于这两个测定值的算术平均 值的1.5%。 2 GB/T20365—2006 附录A （资料性附录） 硫酸软骨素的化学结构式 (xNat) HC HO CH2OH HO H CH. 图A.1 硫酸软骨素A的结构式 (xNat) 0 -OH CH,OH HO OH R=COH Cll: 图 A.2 硫酸软骨素B的结构式 (xNa+) CH,O HO- HO OH HO- OH JIN CH: 图A.3硫酸软骨素C的结构式