ICS 67.050 X 04 GB 中华人民共和国国家标准 GB/T 22996—2008 人参中多种人参皂贰含量的测定 液相色谱-紫外检测法 Determination of ginsenosides in ginseng- LC-UV method 2008-12-31发布 2009-05-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T22996—2008 前言 本标准的附录A、附录B为资料性附录。 本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国秦皇岛出人境检验检疫局，中华人民共和国辽宁出人境检验检 疫局。 本标准主要起草人：宋文斌、李军、董振霖、孙玉岭、隋凯、李佳昌、于一范、代英成、李姝、庞国芳 GB/T22996—2008 人参中多种人参皂贰含量的测定 液相色谱-紫外检测法 1范围 本标准规定了人参中人参皂武（ginsenosides)Re、Rgi、Rf、Rbi、Rc、Rb2含量的液相色谱-紫外检测 方法。 本标准适用于生晒人参中人参皂试Re、Rg1Rf、Rbi、Rc、Rb2含量的测定 本标准的方法检出限：人参皂武Re、Rgi、Rbi、Rc、Rbz均为50mg/kg，人参皂武Rf为25mg/kg。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准。然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研 究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T6379.1测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第1部分：总则与定义（GB/T6379.1一 2004,ISO5725-1:1994,IDT GB/T6379.2测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测量方法重复 性与再现性的基本方法（GB/T6379.2—2004,ISO5725-2：1994,IDT） GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682—2008，ISO3696：1987,MOD） 3原理 采用快速溶剂萃取法（ASE)在高温、高压的条件下，使人参皂武完全彻底地被萃取到甲醇中，经浓 缩、定容，液相色谱测定，外标法定量。 4试剂和材料 水为GB/T6682规定的一级水 4.1甲醇：色谱纯。 4.2乙睛：色谱纯。 4.3海砂：化学纯，粒度：0.65mm~0.85mm。 4.4人参皂武标准物质：Re、Rg1、Rf、Rbi、Rc、Rb²纯度均大于99%。 4.5人参皂武标准液 4.5.1六种人参皂试Re、Rgi、Rf、Rbi、Rc、Rbz标准储备液：1.0mg/mL。用分析天平准确称取适量 上述物质（4.4），分别用甲醇（4.1)配制成1.0mg/mL的标准储备液。储备液避光在2℃～4℃下 保存。 4.5.2六种人参皂武混合标准工作液：根据每种人参皂武的灵敏度和仪器的线性范围，量取适当的六 种人参皂试标准储备液（4.5.1），用甲醇配制成混合标准工作液，避光在2℃～4℃下保存。 注：称取标准物质的质量是按照纯度修正过的质量 5仪器 5.1液相色谱仪：配有紫外检测器。 1 GB/T22996—2008 5.2 加速溶剂萃取仪：型号ASE200，配有11mL萃取池。 5. 3 电子天平：感量为0.01g和0.0001g。 5. 4 旋转蒸发仪。 5.5 鸡心瓶：150mL。 5.6 容量瓶：10mL 5.7 微量移液器：10μL~100uL和1000μL~5000μl。 5.8 样品过滤器：PTFE，0.45μm。 6 6试样的制备与保存 6.1 试样的制备 将人参样品混合均勾。分出0.5kg作为试样，用粉碎机粉碎并通过孔径20目筛。混匀密封，并做 标记。 6.2试样保存 将试样置于4℃条件下贮存。 7分析步骤 7.1提取 分别称取人参试样1g（精确到0.01g）和海砂13.0g将试样与海砂充分混匀，装入事先放入纤维 素滤膜的加速溶剂萃取仪的11mL萃取池中，紧池盖，进行萃取。 加速溶剂萃取条件如下： 萃取溶剂：甲醇； a） b) 压力:10.7MPa; AG c) 温度：140℃； d) 静态萃取时间：5min； e) 静态循环次数：2次； f) 冲洗体积：50%； g）吹扫时间：100s。 用甲醇定容，混匀。取部分样液用0.45um滤膜过滤到进样瓶中，待液相色谱测定。 7.2 色谱测定 7.2.1液相色谱测定条件 液相色谱测定条件如下： 色谱柱：Acclaim120Cls，5μm，250mmX4.6mm（内径）或相当者； a) b) 流速:1 mL/min; c) 检测波长：203nm； d) 柱温：50℃； e) 进样量：10μL； f) 流动相及梯度见表1。 2 GB/T 22996—2008 表1流动相及梯度 步骤 运行时间/min 流动相水/% 流动相乙腈/% 0 0.00 70 30 1 5.50 64 36 2 12.00 20 80 20.00 0 100 4 25,00 70 30 5 30.00 70 30 7. 2. 2 液相色谱测定 用不同浓度的人参皂武混合标准液分别进样，以峰面积和标准工作溶液的浓度绘制标准工作曲线， 样品溶液中人参皂试的响应值均在仪器的测定线性范围内。在上述色谱条件下，各种人参皂武的保留 时间见表2。各种人参皂武的标准物质色谱图参见附录A中的图A.1。各种人参皂武的添加浓度及其 平均回收率的结果参见附录B中的表B.1。 表2各种人参皂武参考保留时间 人参皂贰 保留时间/min 人参皂 保留时间/min Re 4.632 Rbi 10.310 Rgi 4.871 Rc 10.540 Rf 10.014 Rb2 11.215 7.3平行试验 按照上述步骤，对同一试样进行平行试验测定。 7.4空白试验 除不称取试样外，均按上述步骤进行。 8 结果计算 人参中人参皂武含量按式（1)计算： 1000 A X=cX .....(1) m 1.000 式中： X一试样中被测组分含量，单位为毫克每千克（mg/kg）； 从标准曲线上得到被测组分溶液的浓度，单位为微克每毫升（μug/ml.）： V- 样品溶液定容体积，单位为毫升（mL）； 样品溶液所代表试样的质量，单位为克（g）。 计算结果应扣除空白值。 9精密度 9.1一般规定 本标准的精密度数据是按照GB/T6379.1和GB/T6379.2的规定确定的，其重复性和再现性的 值是以95%的可信度来计算。 9.2重复性 在重复性条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限r，人参中人参皂试添加浓 度范围及重复性方程见表3。 3