ICS 67.050 x 04 中华人民共和国国家标准 GB/T22960—2008 河豚鱼和鳗鱼中头孢唑琳、头孢匹林、 头孢氨、头孢洛宁、头孢喹 残留量的测定液相色谱-串联质谱法 Determination of cefazolin,cefapirin,cephalexin,cefalonium, cefquinome residues in fugu and eel- LC-MS-MS method 2009-05-01实施 2008-12-31发布 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T22960—2008 前言 本标准的附录A、附录B为资料性附录。 本标准由国家质量监督检验检疫总局提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局 本标准主要起草人：李学民、王贺琴、母健、曹彦忠、刘晓茂、庞国芳。 GB/T22960—2008 河豚鱼和鳗鱼中头孢唑琳、头孢匹林、 头抱氨芒、头孢洛宁、头孢喹 残留量的测定液相色谱-串联质谱法 1范围 谱-串联质谱测定方法。 本标准适用于河豚鱼和鳗鱼中头孢唑啉、头孢匹林、头孢氨、头孢洛宁、头孢喹残留量的测定。 本标准的方法检出限：头孢唑啉为10ug/kg；头孢匹林、头孢氨苄、头孢洛宁、头孢喹为2.0ug/kg。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T6379.1测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第1部分：总则与定义（GB/T6379.1- 2004,ISO5725-1:1994,IDT) GB/T6379.2测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测量方法重复 性与再现性的基本方法（GB/T6379.2—2004,ISO5725-2:1994,IDT） GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682—2008，ISO3696：1987，MOD） 3原理 试样中五种头孢菌素药物残留用乙睛提取，旋转蒸发除去乙睛，用水定容，液相色谱-串联质谱仪测 定，外标法定量。 4试剂和材料 除另有说明外，所用试剂均为分析纯。 4.1水:GB/T6682,一级。 4.2甲醇：色谱纯。 4.3乙睛：色谱纯。 4.4乙酸。 4.5正已烷。 4.6乙腈饱和的正已烷：取100mL正已烷（4.5）和50mL乙睛（4.3）于250mL分液漏斗中，振摇1min， 静置分层后，弃掉乙腈。 4.7标准物质：头孢唑啉（CAS:25953-19-9）、头孢匹林（CAS:24356-60-3）、头孢氨（CAS：16549-56-7） 头孢洛宁（CAS:5575-21-3）、头孢喹（CAS：118443-89-3），纯度99%。 4.81.0mg/mL五种头孢菌素标准储备溶液：准确称取适量的每种标准物质（4.7），分别用水配制成 浓度为1.0mg/mL的标准储备溶液。储备液贮存在一18℃冰柜中。 4.9五种头孢菌素标准混合工作溶液：根据需要吸取适量的每种头孢菌素标准储备溶液（4.8），用水稀 释成适当浓度的标准混合工作溶液。 1 GB/T22960—2008 4. 10 滤膜：0.2μm。 5仪器 5.1液相色谱-串联四极杆质谱仪：配有电喷雾离子源。 5.2分析天平：感量0.1mg，0.01g。 5. 3 均质器。 5. 4 微量注射器：25μL，100μL 5.5 刻度样品管：5mL，精度为0.1mL 5.6 高速冷冻离心机：带有50mL具塞离心管，转速达到10000r/min以上。 5.7 氮气浓缩仪。 6试样制备与保存 6.1试样的制备 从全部样品中取出有代表性样品约1kg，充分搅碎，混匀，均分成两份，分别装入洁净容器内。密 封后作为试样，标明标记。在抽样和制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的 变化。 6.2试样的保存 将试样于-18℃保存。 7测定步骤 7.1试样溶液的制备 称取5g试样（精确到0.01g）置于50mL离心管中，加入20mL乙睛（4.3），使用均质器（5.3）均 质1min，提取液使用高速冷冻离心机（5.6）在10℃，10000r/min离心10min，把上层提取液移至另 离心管中。用15mL乙睛重复提取一次，合并两次的提取液，并加人10mL乙饱和的正已烷（4.6）， 振荡1min，弃掉正已烷。把提取液移至100mL鸡心瓶中，在40℃旋转蒸发除去乙晴，用2mL水溶解 残渣，摇匀后，样液过0.2μm滤膜（4.10），供液相色谱-串联质谱仪测定 7.2空白样品添加标准混合工作溶液的制备 分别准确移取适量五种头孢菌素标准混合工作溶液（4.9），添加到5.0g样品中，按照7.1步骤操 作，制得头孢唑啉浓度分别为10ug/kg、20μg/kg、40ug/kg、100μg/kg；头孢匹林、头孢氨苄、头孢洛 宁、头孢喹浓度分别为2.0μg/kg、4.0ug/kg、8.0μg/kg、20μg/kg四个样品添加标准混合工作溶 液，供液相色谱-串联质谱仪测定。 7.3测定条件 7.3.1液相色谱参考条件 a) 色谱柱：ZORBAXSB-Ci8，3.5μm，150mmX2.1mm(内径)或相当者； 流动相组成、流速及梯度程序见表1； 柱温：30℃； c) 进样量：20μL。 表1流动相梯度程序及流速 时间/min 流速/（μL/min） 水（含0.1%乙酸）/% 乙腈/% 0. 00 200 95.0 5. 0 2.00 200 95.0 5. 0 2.01 200 40.0 60.0 2 GB/T22960—2008 表1(续) 时间/min 流速/(μL/min） 水（含0.1%乙酸）/% 乙腈/% 8.00 200 40.0 60.0 8. 01 200 95.0 5. 0 15.00 200 95.0 5.0 7.3.2 质谱参考条件 a) 离子源：电喷雾离子源； b) 扫描方式：正离子扫描； c) 检测方式：多反应监测； 5ZC d) 电喷雾电压：5500V； e) 雾化气压力：0.055MPa； f) 气帘气压力：0.079MPa； g) 辅助气流速：6L/min； h) 离子源温度：400℃； i) 定性离子对、定量离子对和去簇电压（DP）、碰撞气能量（CE)见表2。 表2五种头孢菌素的定性离子对、定量离子对、去簇电压和碰撞气能量 化合物中文名称 化合物英文名称 定性离子对(m/) 定量离子对(m/α) 去簇电压/V 碰撞气能量/V 456/324 17 头孢唑啉 cefazolin 456/324 50 456/156 24 424/292 23 头孢匹林 cephapirin 424/292 45 424/152 34 348/158 14 头孢氨苄 cephalexin 348/158 40 348/174 22 459/152 29 头孢洛宁 cefalonium 459/152 35 459/123 18 529/134 21 头孢喹 cefquinome 529/134 49 529/396 19 7.4液相色谱-串联质谱测定 7.4.1定性测定 选择每种待测物质的1个母离子，2个以上子离子，在相同试验条件下，样品中待测物质的保留时 间与基质标准溶液中对应物质的保留时间偏差在土2.5%之内；样品谱图中各定性离子相对丰度与浓度 接近的基质标准溶液的谱图中离子相对丰度相比，偏差不超过表3规定的范围，则可判定为样品中存在 对应的待测物。 表3定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差 以%表示 相对离子丰度K K>50 20<K<50 10<K<20 K≤10 允许的最大偏差 ±20 ±25 ±30 ±50 7.4.2定量测定 用7.2制备的空白样品添加标准混合工作溶液分别进样，以标准工作溶液浓度为横坐标，以峰面积 为纵坐标，绘制标准工作曲线。用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中五种头孢菌素的响应值均 3