ICS 67.050 C 53 GB 中华人民共和国国家标准 GB/T 23382—2009 食品中丙酸钠、丙酸钙的测定 高效液相色谱法 Determination of sodium propionate and calcium propionate in foods- High performance liquid chromatography method 2009-04-08发布 2009-05-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T23382—2009 前言 本标准的附录A为资料性附录。 本标准由中国标准化研究院提出并归口。 本标准主要起草人：梁宝爱、刘军、张素娟、冯晓斌、武向勇、赵娅鸿、孙丽萍、胡晓江、刘宪萍 GB/T23382—2009 食品中丙酸钠、丙酸钙的测定 高效液相色谱法 1范围 本标准规定了食品中丙酸钠、丙酸钙高效液相色谱的测定方法 本标准适用于豆类制品、生湿面制品、面包、糕点、醋、酱油等食品中内酸钠、内酸钙的含量测定。 本标准的方法检出限：0.03g/kg，方法定量限：0.10g/kg。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T6682—2008分析实验室用水规格和试验方法（ISO3696：1987.MOD） 3原理 样品中丙酸钠（钙）酸化后转化为丙酸，经超声波水浴提取或水蒸气蒸馏，收集后调pH值，经高效 液相色谱测定，外标法定量。 4试剂与材料 除另有规定外，试剂均为分析纯。 4.1色谱用水应符合GB/T6682一2008规定的一级水，其他用水符合GB/T6682一2008规定的三 级水。 4.2磷酸。 4.3磷酸氢二铵。 4.4硅油。 4.5磷酸溶液（1mol/L）：在50mL中加人53.5mL磷酸，混匀后，加水定容至1000mL。 4.6 磷酸氢二铵溶液（1.5g/L）：称取磷酸氢二铵1.5g，加水溶解定容至1000mL。 4.7 丙酸钠（钙）或丙酸标准品：纯度≥99%。 4.8标准储备液（10mg/mL）：准确称取丙酸钠1.30g或丙酸钙1.26g或丙酸1g（精确至0.0001g） 用水定容至100mL，配制成丙酸含量为10mg/mL的标准储备液。于4℃冰箱内存，有效期3个月。 4.9微孔滤膜：0.45um，水相。 4.10 pH试纸。 5仪器和设备 5.1高效液相色谱(HPLC)仪：配有紫外检测器或二极管阵列检测器。 5.2天平：感量0.0001g和0.01g。 5.3走 超声波水浴。 5. 4 离心机：转速不低于4000r/min。 5.5组织捣碎机。 1 GB/T23382—2009 5.6具塞塑料离心管：50mL。 5.7水蒸气蒸馏装置：500mL。 5.8 pH计。 6分析步骤 6.1样品制备 固体样品经组织捣碎机捣碎混匀后备用；液体样品摇匀后备用 6.2试样处理 6.2.1蒸馏法：准确称取25g（精确至0.01g）试样（6.1），置于500mL蒸馏瓶中，加人100mL水，再 用50mL水冲洗容器，转移到蒸馏瓶中，加1mol/L磷酸溶液（4.5）20mL，2滴～3滴硅油，进行水蒸气 蒸馏，将250mL容量瓶置于冰浴中作为吸收液装置，待蒸留至约240mL时取出，在室温下放置 滤后，待液相色谱测定。 6.2.2直接浸提法（适用于面包、糕点）：准确称取5g（精确至0.01g）试样（6.1)至100mL烧杯中，加 水20mL，加人1mol/L磷酸溶液（4.5）0.5mL，混匀，经超声浸提10min后，用1mol/L磷酸溶液 （4.5）调pH值至3左右，转移试样至50mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀。将试样全部转移至 50mL具塞塑料离心管中，以不低于4000r/min离心10min，取上清液，经0.45μm微孔滤膜过滤后， 待液相色谱测定。 6.3测定 6.3.1高效液相色谱条件 色谱柱：Cls柱，4.6mmX250mm，5μm或等效色谱柱。 b) 流动相：1.5g/L磷酸氢二铵溶液（4.6），用1mol/L磷酸溶液（4.5）调pH值至2.7~3.5（使 用时配制）；经0.45um微孔滤膜过滤。 流速：1.0mL/min。 d) 柱温：25℃。 e) 进样量：20μL。 波长：214nm。 色谱柱清洗参考条件：实验结束后，用10%甲醇清洗1h，再用100%甲醇清洗1h。 6.3.2标准曲线绘制 瓶中，其他操作同6.2.1样品前处理，其丙酸标准溶液的最终浓度分别为0.02、0.04、0.1、0.2、0.3、 0.4、0.5mg/mL，经0.45μm微孔滤膜过滤，浓度由低到高进样，以浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标， 绘制标准曲线。 6.3.2.2直接浸提法：准确吸取5.0mL标准储备液（4.8）于50mL容量瓶中，用水稀释至刻度，配制 10ml.容量瓶中，分别加入1mol/L磷酸溶液（4.5)0.2mL，用水定容至10mlL，混匀。其丙酸标准溶 到高进样，以浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。 在上述色谱条件下，根据保留时间定性，外标峰面积法定量。高效液相色谱图参见图A.1。 6.3.3定量测定 待测样液中丙酸响应值应在标准曲线线性范围内，超出浓度线性范围则应稀释后再进样分析。 6.4结果计算 样品中丙酸钠（钙）含量（以丙酸计）按式（1）进行计算。 2 GB/T23382—2009 cXVX1000 X= Xf ...(1) m×1000 式中： X 样品中丙酸钠（钙）含量（以丙酸计），单位为克每千克（g/kg）；如以丙酸钠计乘以1.2967，以 丙酸钙计乘以1.2569； 由标准曲线得出的样液中丙酸的浓度，单位为毫克每毫升（mg/mL）； V一一样液最后定容体积，单位为毫升（mL）； m- 一样品质量，单位为克（g）； 一稀释倍数。 计算结果保留三位有效数字。 允许差 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。 回收率 8 蒸馏法：在添加浓度0.25g/kg~5.0g/kg范围内，回收率在90.0%~110.0%之间，相对标准偏差 小于5%。 直接浸提法：在添加浓度0.25g/kg~5.0g/kg范围内，回收率在80.0%~110.0%之间，相对标准 偏差小于5%。