ICS 07.080 A 21 中华人民共和国国家标准 GB/T 38169—2019 蕨藻红素含量测定 高效液相色谱法 Determination of caulerpin content-High performance liquid chromatography 2019-10-18发布 2019-10-18实施 国家市场监督管理总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T38169—2019 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由中国标准化研究院提出并归口。 本标准起草单位：中国水产科学研究院、中国水产科学研究院南海水产研究所、中国标准化研究院、 北京萨姆伯科技有限公司、中国农村技术开发中心、中国科学院过程工程研究所。 本标准主要起草人：杨贤庆、邓建朝、李乐、荣辉、宋金龙、岑剑伟、马海霞、李来好、马爱进、郝帅、 戴炳业、黄永东。 SAC 1 GB/T38169—2019 蕨藻红素含量测定 高效液相色谱法 1范围 本标准规定了用高效液相色谱法测定蕨藻红素含量的方法。 本标准适用于蕨藻天然植物中蕨藻红素含量的测定。 本方法的定量限为12.5mg/kg。 规范性引用文件 2 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T30891水产品抽样规范 3 3原理 试样中加人乙醇溶液，经微波辅助提取，高效液相色谱-紫外检测器测定，外标法定量 4 试剂或材料 除非另有规定，仅使用分析纯试剂。 4.1水：GB/T6682，一级。 4.2 无水乙醇（CH:CH,OH)：色谱纯。 4.3 甲醇(CHOH)：色谱纯。 4.4 85%（体积分数）乙醇溶液： 取850mL无水乙醇，加150mL水，混匀。 4.5 蕨藻红素：纯度≥98%。 4.6 蕨藻红素标准储备液： 称取10.0mg蕨藻红素，用无水乙醇溶解后转人100mL容量瓶中，稀释至刻度，混匀，配制成浓度 为100μg/mL储备液，于一18℃保存，保存期为3个月。 4.7 有机相微孔滤膜：孔径0.22μm。 5 仪器设备 高效液相色谱仪：配有二极管阵列检测器或紫外检测器 5.2 常压微波辅助萃取仪：配100mL提取罐。 5.3 分析天平：感量0.01g.0.0001g。 5.4 布氏漏斗。 1 GB/T38169—2019 6测定步骤 6.1样品制备 按GB/T30891的规定执行。 6.2 提取 称取2.00g鲜样或2.00g干样置于100mL提取罐中，加入40mL85%乙醇溶液，将提取罐放人 常压微波辅助萃取仪中。微波提取温度设定为70℃、时间为25min、功率为800W。提取结束后取出 提取罐，冷却至室温，抽滤，将滤液转人100mL容量瓶中。滤渣加人40mL85%乙醇溶液，重复上述步 骤提取一次，合并提取液，用适量85%乙醇溶液清洗残渣，合并滤液于容量瓶中，用85%乙醇溶液定容 至刻度，混匀，吸取1mL溶液过0.22μm微孔滤膜，待测。 6.3测定 6.3.1高效液相色谱参考条件 高效液相色谱参考条件如下： a) 色谱柱：Cis柱，250mmX4.6mm（内径）,5μm; b) 流动相：甲醇-水（80：20，体积比）； c) 流速：1.0mL/min; d) 检测波长：315nm； e) 柱温：30℃； 进样体积：10μL。 6.3.2标准曲线绘制 准确移取适量蕨藻红素储备溶液，用85%乙醇溶液稀释成质量浓度分别为0.25mg/L、0.50mg/L、 1.00mg/L、5.00mg/L、10.00mg/L、50.00mg/L和100.00mg/L的系列标准工作溶液，供高效液相色 谱测定。以测得峰面积为纵坐标，对应的标准溶液质量浓度为横坐标，绘制标准曲线。求回归方程和相 关系数。 6.3.3色谱测定与确证 将标准工作溶液和待测溶液分别注人高效液相色谱中，以保留时间定性，以待测液峰面积代人标准 曲线中定量，样品中蕨藻红素质量浓度应在标准工作曲线质量浓度范围内。蕨藻红素标准溶液色谱图 参见附录A。 6.4 空白实验 除不加试样外，采用完全相同的分析步骤、试剂和用量，进行平行操作。 7结果计算 按照式(1)计算： :(1) A,m 2 GB/T38169—2019 式中： Xl——样品中蕨藻红素的质量分数，单位为毫克每千克（mg/kg）； 标准溶液中蕨藻红素的质量浓度，单位为毫克每升（mg/L）； P. A ——样液中蕨藻红素的峰面积数值； V 一试样最终定容体积，单位为毫升（mL）； A，一标准溶液中蕨藻红素的峰面积数值； 称取试样的质量，单位为克（g）。 m 计算结果应扣除空白值，测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留至小数点后1位。 重复性 8 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。