ICS 07.080 A21 中华人民共和国国家标准 GB/T 38577—2020 植物激素类次生代谢产物的生物活性测定 指示植物法 Determination of the biological activity for plant hormone-related secondary metabolitesIndicator plant method 2020-03-31实施 2020-03-31发布 国家市场监督管理总局 发布 国家标准化管理委员会 GB/T38577—2020 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由中国标准化研究院提出并归口。 本标准起草单位：中国计量大学、中国标准化研究院、浙江省检验检疫科学技术研究院 本标准主要起草人：张雅芬、叶子弘、黄超群、马爱进、俞晓平、申屠旭萍、许益鹏、崔海峰、李翼、 陈丽、吴娟。 1 GB/T38577—2020 植物激素类次生代谢产物的生物活性测定 指示植物法 1范围 本标准规定了用指示植物法测定植物激素类次生代谢产物生物活性的方法 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3术语、定义和缩略语 3.1术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1.1 植物激素类次生代谢产物planthormone-related secondarymetabolites 来自植物自身合成的以及通过微生物发酵或化学合成获得的调控植物生长、发育与休眠的活性 物质。 3.1.2 生物活性biological activity 等浓度的植物激素类次生代谢产物与其相对应的标准物促进或抑制植物生长、发育与休眠能力的 相对值。 3.2缩略语 下列缩略语适用于本文件。 GA3:赤霉酸(gibberellic acid) NAA:茶乙酸(l-naphthylaceticacid) ZT:玉米素(zeatin) 4原理 定浓度范围内，植物激素类活性物质的浓度与其促进相应指示植物的特定组织生长或特定物质 合成的能力成正比。以标准物NAA为参照，根据小麦胚芽鞘相对伸长量和NAA浓度对数的线性回归 关系得到标准曲线，计算在线性范围内使胚芽鞘的相对伸长程度相当的NAA浓度与试样浓度的比值， 表示1mg/mL试样所具有的生长素活性；以标准物ZT为参照，根据尾穗子叶中苋红素合成量和ZT 1 GB/T38577—2020 浓度对数的线性回归关系得到标准曲线，计算在线性范围内使红素合成量相当的ZT浓度与试样浓 度的比值，表示1mg/mL试样所具有的细胞分裂素活性；以标准物GA为参照，根据大麦种子糊粉层 中α-淀粉酶活性和GA浓度对数的线性回归关系得到标准曲线，计算在线性范围内使诱导产生的α-淀 粉酶活性相当的GA，浓度与试样浓度的比值，表示1mg/mL试样所具有的赤霉素活性 5试剂或材料 除非另有规定，仅使用分析纯试剂，水为GB/T6682规定的一级水。 5.1小麦种子 小麦（TriticumaestivumL.），长麦6135。当年采收，颗粒饱满，发芽率≥90%。 5.2尾穗苋种子 尾穗苋（AmaranthuscaudatusL.），红色品种。当年采收，颗粒饱满，发芽率≥90%。 5.3大麦种子5 大麦（HordeumulgareL.），二棱大麦。当年采收，颗粒饱满，发芽率≥90%。 5.41%次氯酸钠溶液 量取100mL10%次氯酸钠，用水定容至1000mL，临用前配制。 5.50.1%（W/V）淀粉溶液 称取可溶性淀粉1.00g，加水至50mL，加热至完全溶解后，再加入磷酸二氢钾8.16g，待其溶解后 用水定容至1000mL。临用前配制。 5.6I2-KI溶液 称取碘化钾0.60g，碘0.06g，用0.05mol/L的盐酸溶解并定容至1000mL，临用前配制。 5.71×10-8mol/L乙酸缓冲液 称取三水合乙酸钠0.136g，用水溶解后定容至1000mL，配制成1×10-3mol/L的乙酸钠溶液；用 移液枪吸取57uL乙酸溶液，用水定容至1000mL，配制成1×10-3mol/L的乙酸溶液。分别量取 590mL1×10-3mol/L的乙酸钠溶液与410mL1×10-3mol/L乙酸溶液，混合后，加人1g链霉素， 摇匀。 5.8含L-酪氨酸的磷酸缓冲液 称取L-酪氨酸0.20g，用5.5mL0.5mol/L的盐酸溶解；称取十二水合磷酸氢二钠2.39g，磷酸二 氢钾0.91g，用水溶解后定容至100mL，配制成1/15mol/L的磷酸缓冲液（pH7.0）。将两者混匀后定 容至500mL。4℃保存备用。 5.9磷酸-柠檬酸缓冲液，pH5.0 称取磷酸氢二钾1.80g，柠檬酸1.02g，蔗糖20g，加入900mL水溶解后用pH计测量并调整pH 至5.0，用水定容至1000mL，充分混匀后，4℃保存备用。 2 GB/T38577—2020 5.10NAA 纯度≥98%。 5.11GA3 纯度≥98%。 5.12ZT 纯度98%。 5.131mg/mLNAA标准贮备液 称取10.0mgNAA标准品，用0.5mL无水乙醇溶解，用水定容至10mL，充分混匀后，4℃冰箱冷 藏，保存期1个月。 5.141mg/mLGA标准贮备液 称取10.0mgGA标准品，用0.5mL无水乙醇溶解，用水定容至10mL，充分混勾后，4℃冰箱冷 藏，保存期1个月。 5.151mg/mLZT标准购备液 称取10.0mgZT标准品，用0.5mL无水乙醇溶解，用水定容至10mL，充分混匀后，4℃冰箱冷 藏，保存期1个月。 5.16NAA标准工作液 作液。吸取316μL1mg/mLNAA标准贮备液684μL磷酸-柠檬酸缓冲液，混匀，得3.16×10-lmg/ml NAA溶液。依次10倍稀释得3.16×10-5mg/mL、3.16×10-mg/mLNAA标准工作液。临用前配制。 5.17GA标准工作液 吸取1mL1mg/mLGA，标准贮备液，加人至9mL乙酸缓冲液中，混匀，得1×10-1mg/mL溶 液。依次10倍稀释得1.00×10-3mg/mL、1.00X10-4mg/mL、1.00×10-5mg/mLGA，标准工作液。 吸取316μL1mg/mLGA3标准备液，684μL乙酸缓冲液，混匀，得3.16×10-lmg/mLGA：溶液。 依次10倍稀释得3.16X10-4mg/mL、3.16X10-5mg/mL、3.16×10-mg/mLGA，标准工作液。临 用前配制。 5.18 ZT标准工作液 吸取1mL1mg/mLZT标准贮备液，加人至9mL含L酪氨酸的磷酸缓冲液中，混匀，得1X10-1 mg/mlZT溶液。依次10倍稀释得1.00×10-²mg/mlL、1.00×10-4mg/mL、1.00×10-mg/mLZT标准 工作液。吸取316μL1mg/mLZT标准贮备液，684μL含L-酪氨酸的磷酸缓冲液，混勾，得3.16×10-1 mg/mLZT溶液。依次10倍稀释得3.16×10-4mg/mL、3.16×10-smg/mLZT标准工作液。临用前 配制。 3.