ICS 13.300;13.020.40 CCS A 80 中华人民共和国国家标准 GB/T 42367—2023 化学品 原生动物活性污泥抑制试验 Chemicals-Protozoan activated sludge inhibition test 2023-03-17发布 2023-10-01实施 国家市场监督管理总局 发布 国家标准化管理委员会 GB/T 42367—2023 目 次 前言 引言 1 范围 2 规范性引用文件 3 术语和定义 试验原理 受试物信息 6 参比物 7 试验准备 试验程序 9 质量保证与质量控制 10 数据处理· 11 报告· 附录A（资料性）试验用水 附录B（资料性） 底物 10 附录C（资料性） 洋地黄皂苷溶液 11 附录D（资料性） 浓度-效应曲线 12 参考文献 13 GB/T42367—2023 前言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由全国危险化学品管理标准化技术委员会（SAC/TC251)提出并归口。 与化学品管理技术中心、中国检验检疫科学研究院、新安润（北京）咨询有限公司、厦门市格灵生物技术 有限公司、广东环境保护工程职业学院、广东全庆检测有限公司、西安凯金哲检测有限公司、金久科技有 限公司。 本文件主要起草人：梅承芳、邓桂荣、杨山、窦从从、罗凤娟、陈燕玲、黄友达、刘纯新、曾国驱、柳燕贞、 龙伟年、周丽丽、徐志锐、彭宜俊、吴才春、毛晓尧。 GB/T42367—2023 引言 生活污水处理厂（STP)开展生物处理的原理是将流人的污水中含有的有机物部分转化为微生物生 物量，进而将微生物与液体分离得到净化的污水，目的在于最大程度地减少污水中的有机负荷，并减少 氨氮、硝酸盐和磷酸盐等营养物质的含量，同时使生物污泥的量最小化。活性污泥的生物吞噬作用对这 一处理过程起到了促进作用。在传统的污水厂中，通常由纤毛虫主导上述吞噬作用，它们以细菌为食、 净化污水，并进一步提高污水的透明度，降低了出水中的有机负荷。 物组成。 本试验基于一项国际比对研究，相关试验方法已在5家实验室中得到了验证。上述研究采用了 5种假定具有非极性或极性麻醉型毒性作用模式（MOA)的单一组分有机物作为受试物，分别为：1-辛胺 （CAS：111-86-4）、3,5-二氯苯酚（CAS：591-35-5）、二甲基亚矾（CAS：67-68-5）、二苯醚（CAS：101-84-8） 和六氯酚（CAS：70-30-4），这些物质的分配系数范围为-1.36～6.91。 如采用本方法对混合物开展测试并将获得的数据用于监管时，需考虑试验结果是否充分且有效 如有法规明确规定可对混合物进行测试，则可直接采用本文件 V GB/T 42367—2023 化学品原生动物活性污泥抑制试验 1范围 本文件描述了化学品原生动物活性污泥抑制试验的试验原理、受试物信息、参比物、试验准备、试验 程序、质量保证与质量控制、数据处理、报告。 本文件适用于化学品的原生动物活性污泥抑制试验。 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于 本文件。 GB/T 21801 化学品 快速生物降解性 呼吸计量法试验 GB/T 21802 化学品 快速生物降解性改进的MITI试验（I) GB/T 21803 化学品 快速生物降解性 DOC消减试验 GB/T 21831 化学品 快速生物降解性 密闭瓶法试验 GB/T 21845 化学品 水溶解度试验 GB/T 21852 化学品 分配系数（正辛醇-水）高效液相色谱法试验 GB/T 21853 化学品 分配系数（正辛醇-水）摇瓶法试验 GB/T 21856 化学品 快速生物降解性二氧化碳产生试验 GB/T 21857 化学品 快速生物降解性改进的OECD筛选试验 GB/T 22228 工业用化学品 固体及液体的蒸气压在10-1Pa至105Pa范围内的测定静态法 GB/T 22229 工业用化学品 固体及液体的蒸气压在10-3Pa至1Pa范围内的测定蒸气压平 衡法 GB/T27850化学品快速生物降解性通则 EN15934污泥、处理过的生物废弃物、土壤和废弃物 通过测定干物质含量或水分计算干物质 质量分数（Sluge，treatedbiowaste，soiland wasteCalculationof drymatterfractionafterdetermina tion of dry residue or water content) 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 x%效应浓度x%effectiveconcentration；EC 在给定测试周期内，与对照组相比，导致活性污泥吞噬活性降低%时的受试物浓度。 3.2 无可观察效应浓度 no observed effectconcentration;NOEC 在给定测试周期内，与对照组相比，在统计学意义上对试验组未产生显著效应（P≥0.05）的最高受 试物浓度。 1 GB/T423672023 4试验原理 4.1本方法用于评估特定条件下不同浓度的化学物质对活性污泥吞噬作用（即分散细菌的消耗）的影 响，适用于可溶于水难溶于水和挥发性的受试物。对于水溶解度有限的受试物，可能无法得到EC5 值。对于挥发性的受试物，尽管试验过程中使用密闭的试验容器，但仅当暴露期结束时仍有大于80% 的受试物留存在反应体系中时，试验结果才是有效的。难测试化学物质的试验见参考文献。 4.2采用2mL培养体积的玻璃试验瓶，将活性污泥样品暴露于受试物。试验瓶用氧渗透型瓶盖密封 后置于22℃士1℃振荡22h。试验开始时，污泥样品中的原生动物以悬浮细菌为食，导致对照组中细 菌浊度降低，但受到化学抑制的试验组中细菌未被消除。为了量化原生动物的吞噬活性，分别在培养 2h（ti）和22h（t）测定光密度（入=440nm），以获得所添加细菌随时间的减少量。基于两个光密度值 的差异，计算与未经处理的对照组相比吞噬活性减少的百分比。本试验通常用于确定受试物的EC（如 EC5o）。为补偿添加的细菌底物与污泥絮体之间的非特异性反应（如结合作用）或受试物对污泥样品浊 度的影响（如解聚作用），空白对照组和每个浓度的试验组中都应包括去除原生动物（因而无吞噬作用） 的污泥平行样品。 5受试物信息 试验前，应掌握下列受试物信息： a）结构式； b）纯度； c） 按照GB/T21852和GB/T21853测定的正辛醇-水分配系数； d) 按照GB/T21801、GB/T21802、GB/T21803、GB/T21831、GB/T27850、GB/T21856和 GB/T21857测定的快速生物降解性； e） 按照GB/T21845测定的水中溶解度，尤其是受试物在试验条件下的水溶解度； f) 按照GB/T22228和GB/T22229测定的蒸气压；水溶解度和蒸气压可用于计算亨利常数，以 表征受试物的挥发性； g) 受试物在试验溶液中的定量分析方法。 6参比物 参比物测试作为一种技术手段，用于验证试验条件是否符合要求。3，5-二氯苯酚对活性污泥吞噬 作用抑制的EC5在1.5mg/L～5.1mg/L范围内。由于ECso值可能因试验所用的污泥不同而具有显著 差异，上述EC5o值范围仅供参考，并非满足试验有效性的必要条件。参比物的试验结果应在测试报告 中注明。 7试验准备 7.1试验设备 常规设备包括： a)i 透明玻璃螺口瓶，45mm×15mm（外观尺寸），体积4mL； b) 开孔盖（开孔螺纹盖），特氟龙表面、硅胶衬垫； c) 转速可调至250r/min的旋转振荡器，其支架可使试验瓶呈倾斜状，与水平面呈20°～40° 2 GB/T42367—2023 夹角； d) 光度计（入=440nm）； 保温柜或保温室，温度可维持在22℃士1℃。 7.2试验用水 7.2.1宜用合成水稀释活性污泥并配制系列浓度的受试物溶液，其组分见附录A。 7.2.2某些情况下可能需要对试验用水进行调整，如在不同的pH条件下开展测试时。使用经调整的 试验用水应具有充分的理由，并予以详细描述。 7.3接种物 7.3.1选择来源于运行良好且主要处理生活污水的处理厂曝气池的活性污泥作为吞噬试验的接种物。 采集活性污泥时应避免浮渣，且不在浮渣累积的死角处进行采集。将采样工具完全浸没至液面下取样， 如采样过程中取样瓶发生飘浮，可将玻璃瓶轻轻倾斜或用玻璃棒进行手动搅拌，易使表层沉降至瓶 底部。 7.3.2试验前应获悉污泥的干重，悬浮物固体浓度的适宜范围为2g/L～4g/L。通常情况下，污水处 燥至恒重，精确至0.1mg。如已经测定了干物质或含水率，也可采用其他替代的标准方法如EN15934 或类似标准，计算干物质质量分数。根据干重结果计算原始活性污泥悬浮液的添加体积。应将污泥悬 浮在2mL测试体系中，以获得悬浮固体质量浓度为0.9g/L士0.1g/L的活性污泥混合液。 7.3.3活性污泥应于采集当天使用。如未当天使用，应将整批未经稀释的原始污泥置于4℃～7℃冰 箱中保存，最长不超过一周。 7.4底物 7.4.1具有较低的聚集、絮凝和活性污泥絮团吸附特性的细菌可作为底物使用，满足上述要求且适合 作为污泥中原生动物食物源的细菌底物见附录B，也可使用符合试验有效性标准的其他菌株。 7.4.2根据验证试