ICS 13.060 CCS C 51 中华人民共和国国家标准 GB/T 5750.12—2023 代替GB/T5750.12—2006 生活饮用水标准检验方法 第12部分：微生物指标 Standard examination methods for drinking water- Part 12:Microbiological indices 2023-10-01实施 2023-03-17发布 国家市场监督管理总局 发布 国家标准化管理委员会 GB/T 5750.12—2023 目 次 前言 引言 1 范围 2 规范性引用文件 3 术语和定义 菌落总数 4 总大肠菌群 6 耐热大肠菌群· 22 大肠埃希氏菌·. 8 贾第鞭毛虫· 27 隐孢子虫· 9 44 10 肠球菌 45 11 产气荚膜梭状芽孢杆菌 53 GB/T5750.12—2023 前言 起草。 本文件是GB/T5750《生活饮用水标准检验方法》的第12部分。GB/T5750已经发布了以下 部分： 一第1部分：总则； 第2部分：水样的采集与保存； 一第3部分：水质分析质量控制； 第4部分：感官性状和物理指标； 第5部分：无机非金属指标； 第6部分：金属和类金属指标； 一第7部分：有机物综合指标； 一第8部分：有机物指标； 一第9部分：农药指标； 一第10部分：消毒副产物指标； 第11部分：消毒剂指标； 第12部分：微生物指标； 第13部分：放射性指标。 本文件代替GB/T5750.12一2006《生活饮用水标准检验方法微生物指标》，与GB/T5750.12 2006相比，除结构调整和编辑性改动外，主要技术变化如下： a）增加了6个检验方法（见4.2、8.2、9.2、10.1、10.2、11.1）。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由中华人民共和国国家卫生健康委员会提出并归口。 本文件起草单位：中国疾病预防控制中心环境与健康相关产品安全所、中国科学院生态环境研究中 心、吉林省疾病预防控制中心、北京市科学技术研究院分析测试研究所。 本文件主要起草人：施小明、姚孝元、张岚、唐宋、丁理、李霞、张晓、李红岩、刘思洁、高丽娟、张艳芬、 赵薇、马凯。 本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为： 本次为第二次修订。 GB/T5750.12—2023 引言 GB/T5750《生活饮用水标准检验方法》作为生活饮用水检验技术的推荐性国家标准，与GB5749 安全性评价提供检验方法。 GB/T5750由13个部分构成。 第1部分：总则。目的在于提供水质检验的基本原则和要求。 第2部分：水样的采集与保存。目的在于提供水样采集、保存、管理、运输和采样质量控制的基 本原则、措施和要求。 第3部分：水质分析质量控制。目的在于提供水质检验检测实验室质量控制要求与方法。 第4部分：感官性状和物理指标。目的在于提供感官性状和物理指标的相应检验方法。 第5部分：无机非金属指标。目的在于提供无机非金属指标的相应检验方法。 第6部分：金属和类金属指标。目的在于提供金属和类金属指标的相应检验方法。 第7部分：有机物综合指标。目的在于提供有机物综合指标的相应检验方法。 第8部分：有机物指标。目的在于提供有机物指标的相应检验方法。 第9部分：农药指标。目的在于提供农药指标的相应检验方法。 第10部分：消毒副产物指标。目的在于提供消毒副产物指标的相应检验方法。 第11部分：消毒剂指标。目的在于提供消毒剂指标的相应检验方法。 第12部分：微生物指标。目的在于提供微生物指标的相应检验方法。 第13部分：放射性指标。目的在于提供放射性指标的相应检验方法。 Ⅱ GB/T5750.12—2023 生活饮用水标准检验方法 第12部分：微生物指标 1范围 本文件描述了生活饮用水和水源水中菌落总数、总大肠菌群、耐热大肠菌群、大肠埃希氏菌、第鞭 毛虫、隐孢子虫、肠球菌和产气荚膜梭状芽孢杆菌的测定方法。 本文件适用于生活饮用水和水源水中微生物指标的测定。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于 本文件。 GB4789.28食品安全国家标准食品微生物学检验培养基和试剂的质量要求 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB19489实验室生物安全通用要求 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 菌落总数standardplate-countbacteria 在一定条件下，经一定时间培养后所得1mL水样中的微生物菌落个数。 3.2 总大肠菌群 羊total coliforms 一群在37℃培养，24h内能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。 3.3 耐热大肠菌群thermotolerant coliformbacteria 一群在44.5℃培养，24h内能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。 3.4 大肠埃希氏菌 Escherichiacoli 群能发酵多种糖类、产酸产气、周身鞭毛、能运动、无芽孢的革兰氏阴性短杆菌，存在于人和温血 动物肠道中。 3.5 Giardia 贾第鞭毛虫 种可在水中或其他介质中发现的原虫类寄生虫，可感染人类致病。 注：贾第鞭毛虫孢囊呈椭圆形，长度为8μm~14μm，宽度为7μm~10μm，孢囊形成初期内部有2个细胞核，成熟 后增加至4个细胞核， 1 GB/T5750.12—2023 3.6 隐孢子虫 Cryptosporidium 一种可在水中或其他介质中发现的原虫类寄生虫，可感染人类致病。 注：隐孢子虫卵囊为稍微椭圆的圆形，直径4μm～8μm，成熟卵囊内部有4个细胞核。 3.7 肠球菌Enterococcus 一类成双或呈链状排列、兼性厌氧、无芽孢和荚膜的革兰氏阳性球菌，属D族链球菌，存在于人和 温血动物的肠道中。 3.8 产气英膜梭状芽孢杆菌Clostridiumperfringens -类能还原亚硫酸盐，具有芽孢的革兰氏阳性厌氧杆菌，存在于人和温血动物肠道中。 3.9 最可能数 mostprobablenumber;MPN 基于泊松分布，利用统计学原理，根据一定体积不同稀释度样品经培养后产生的目标微生物阳性 数，估算一定体积样品中目标微生物存在的数量，即单位体积存在目标微生物的最大可能数。 4菌落总数 4.1 平血计数法 4.1.1原理 1mL水样在营养琼脂培养基上、在有氧条件下36℃土1℃培养48h后，所得1mL水样中的菌落 总数的方法。 4.1.2 营养琼脂培养基 4.1.2.1 成分 按如下成分配制： 蛋白陈 10.0 g 牛肉膏 3.0 g c) 氯化钠 5.0 g d) 琼脂 10.0 g~20.0 g (a 纯水 1 000 mL 4.1.2.2 制法 将上述成分混合后，加热溶解，调整pH为7.4～7.6，分装于玻璃容器中，经121℃高压蒸汽灭菌 20min.0℃~4℃冷藏保存 4.1.3 仪器设备 4.1.3.1 高压蒸汽灭菌器。 4.1.3.2 培养箱：36℃土1℃。 4.1.3.3 电炉。 4.1.3.4 电子天平。 4.1.3.5 冰箱。 2 GB/T5750.12—2023 4.1.3.6放大镜或菌落计数器。 4.1.3.7pH计或精密pH试纸。 4.1.3.8无菌试管、平皿（直径为9cm）、无菌吸管或移液器、采样瓶等。 4.1.4试验步骤 4.1.4.1生活饮用水 4.1.4.1.1以无菌操作方法用无菌吸管或移液器吸取1mL充分混匀的水样，注人无菌平皿中，倾注约 15mL已融化并冷却到45℃左右的营养琼脂培养基，并立即旋摇平皿，使水样与培养基充分混匀。每 计数，即为1mL水样中的菌落总数。 4.1.4.2水源水 盐水的试管中，混匀成1：10稀释液。 4.1.4.2.2用无菌吸管或移液器吸取1：10的稀释液1mL注人盛有9mL无菌生理盐水的试管中，混 匀成1：100稀释液。按同法依次稀释成1：1000、1：10000等稀释度的液体备用。每稀释一个稀释 度，须更换一次1mL无菌吸管或吸头。 4.1.4.2.3用无菌吸管或移液器吸取2个～3个适宜稀释度的水样1mL，分别注人无菌平皿内。以下 操作同生活饮用水的检验步骤。 4.1.5试验数据处理 4.1.5.1结果报告 做平皿菌落计数时，可用眼睛直接观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平皿的菌落数 后，应求出同稀释度的平均菌落数，供下一步计算时使用。在求同稀释度的平均数时，若其中一个平血 有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平皿作为该稀释度的平均菌落数。若片 状菌落不到平皿的一半，而其余一半菌落数分布又很均匀，则可将此半皿计数后乘2以代表全皿菌落 数。然后再求得该稀释度的平均菌落数。 4.1.5.2不同稀释度的选择及报告方法 4.1.5.2.1选择平均菌落数在30～300之间者进行计算，若只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围， 则将该菌落数乘以稀释倍数报告结果（见表1中实例1）。 4.1.5.2.2若有两个稀释度，其生长的菌落数均在30～300之间，则视两者之比值来决定，若其比值小 于2，应报告两者的平均数（如表1中实例2）。若大于或等于2，则报告其中稀释度较小的菌落总数（如 表1中实例3和实例4）。 4.1.5.2.3若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告 结果（见表1中实例5）。 4.1.5.2.4若所有稀释度的平均菌落