ICS 65.120 B 46 中华人民共和国国家标准 GB 7300.202—2019 饲料添加剂 第2部分：维生素及类维生素 维生素D3 油 Feed additives-Part 2:Vitamins,provitamins and chemically well-defined substances having similar effectVitamin D3 oily form 2020-07-01实施 2019-12-17发布 国家市场监督管理总局 发布 国家标准化管理委员会 GB7300.202—2019 前言 本部分的第1章、第4章、第5章、第6章为强制性的，其余为推荐性的。 GB7300《饲料添加剂》按产品分为若干部分。 本部分为GB7300的第202部分。 本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草 本部分由中华人民共和国农业农村部提出并归口。 本部分起草单位：中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所[国家饲料质量监督检验中心 （北京）、浙江省兽药饲料监察所、浙江花园生物高科股份有限公司、浙江新和成股份有限公司。 本部分主要起草人：赵小阳、钱国平、杨金枢、徐思远、田静、施杏芬、姚圆圆。 GB7300.202—2019 饲料添加剂 第2部分：维生素及类维生素 维生素 D3 油 1范围 贮存和保质期。 本部分适用于以羊毛脂胆固醇为起始原料经化学合成的维生素D树脂油，溶于植物油中，并配以 适量的抗氧化剂制得的饲料添加剂维生素D：油。 2规范性引用文件 2 SZIG 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件 化学试剂 GB/T 601 标准滴定溶液的制备 GB/T 602 化学试剂 杂质测定用标准溶液的制备 GB/T 603 化学试剂 试验方法中所用制剂及制品的制备 GB 5009.227 食品安全国家标准食品中过氧化值的测定 GB5009.229—2016食品安全国家标准食品中酸价的测定 GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB10648饲料标签 GB/T13079—2006饲料中总砷的测定 GB/T14699.1饲料采样 3化学名称、分子式、相对分子质量和结构式 化学名称：（5Z，7E）-9,10-开环胆笛-5，7,10（19）-三烯-3β-醇 分子式：C2H44O 相对分子质量：384.65（以C27H4O计，按2016年国际相对原子质量表计算） 结构式： CH CH H 2.113 CH3 10- H 4要求 4.1产品规格 不低于100万IU/g，一个国际单位维生素D相当于0.025μg。 1 GB 7300.202—2019 4.2 外观和性状 本品为黄色至褐色、澄清液体，几乎不溶于水，可溶于乙醇、油脂，温度较低时可发生部分凝固或结 晶析出现象。 4.3 技术指标 技术指标应符合表1规定。 表1技术指标 项目 指标 含量（以C27H4O计，占标示量的百分数）/% 95.0~110 酸值/(mg/g) ≤2.0 过氧化值/（mmol/kg） ≤10.0 重金属（以Pb计）/（mg/kg) ≤10.0 砷/(mg/kg) ≤2.0 5 试验方法 本部分所用的试剂和水，除特殊说明外，均指分析纯试剂和符合GB/T6682中规定的三级水，色谱 用水符合GB/T6682中一级用水规定，试剂和溶液的制备应符合GB/T601,GB/T602和GB/T603 的规定。 5.1试剂和溶液 5.1.1 正已烷：色谱纯。 5.1.2 正戊醇：色谱纯。 5.1.3 甲醇：色谱纯。 5.1.4 环已烷。 GAC 5.1.5 无水乙醇。 5.1.6 2,6-二叔丁基对甲酚（BHT)。 5.1.7 维生素D3对照品：≥98.0%。 5.1.8维生素D标准贮备溶液：称取约100mg（精确至0.01mg）维生素D，对照品（5.1.7)，置于100mL 棕色容量瓶中，加适量溶剂（正相色谱用正已烷，反相色谱用无水乙醇）使其溶解，并稀释定容至刻度，摇 匀。该标准贮备溶液浓度为40000IU/mL，在一18℃～一20℃冰箱中保存，有效期12个月。 5.1.9维生素D，标准工作溶液：准确吸取维生素D：标准贮备溶液（5.1.8）适量于50mL棕色容量瓶 中，加溶剂（正相色谱用正已烷，反相色谱用无水乙醇）稀释成浓度分别为100IU/mL、200IU/mL 800IU/mL、2000IU/mL、8000IU/mL的标准工作溶液a，在一18℃~一20℃冰箱中保存，有效期 3个月。 5.2仪器 5.2.1实验室常用仪器设备 5.2.2 超声波水浴。 2 GB7300.202—2019 5.2.3分析天平：感量为0.0001g，0.00001g。 5.2.4紫外-可见分光光度计。 5.2.5高效液相色谱仪，配有紫外可调波长检测器或二极管矩阵检测器。 5.3感官检验 取适量样品置于清洁干燥的白瓷盘中，符合4.2。 5.4鉴别试验 5.4.1制备含量相当于400IU/mL维生素D的环已烷溶液，在波长250nm～300nm之间检测，结果 显示在（267土1)nm处呈现最大吸收峰。 5.4.2按照色谱条件（5.5.2.2），维生素D：标准工作溶液a（5.1.9）和试样溶液（5.5.2.1)用液相色谱外标 法测定，试样溶液中维生素D的色谱峰保留时间与标准工作溶液a（5.1.9）色谱峰保留时间一致。维生 素D色谱图参见附录A中的图A.1、图A.2、图A.3和图A.4。 5.5维生素D3含量的测定 5.5.1原理 试样中维生素D经适量溶剂（正相色谱用正已烷，反相色谱用无水乙醇）溶解后，用液相色谱测 定，以254nm为检测波长，经流动相洗脱分离后，外标法计算维生素D的含量，待测样液中维生素Ds 的响应值应在工作曲线范围内。试样中维生素D的总量包括色谱峰中能检测到的维生素D的量以 及由于温度因素而转化成预维生素D，的量。 5.5.2分析步骤 5.5.2.1试液的制备 称取试样约50mg~100mg（精确至0.01mg）置于100mL棕色容量瓶中，用适量溶剂（正相色谱 用正已烷，反相色谱用无水乙醇）溶解定容至刻度，混匀，用0.22μm滤膜过滤，供高效液相色谱仪分析。 5.5.2.2参考色谱条件 5.5.2.2.1正相色谱（仲裁法） 色谱柱：硅胶柱，柱长250mm，内径4.6mm，粒度5μm，或性能相当者。 流动相：正已烷十正戊醇=996十4。 流速：2.0mL/min。 检测波长：254nm。 进样量：20μL。 5.5.2.2.2反相色谱 色谱柱：Cls柱，柱长250mm，内径4.6mm，粒度5μm，或性能相当者。 流动相：甲醇十水=950十50。 流速：1.0mL/min。 检测波长：254nm。 进样量：20μL。 3 SAG GB7300.202—2019 5.5.2.3预维生素D校正因子的测定 准确移取1.00mL维生素D，标准贮备溶液（5.1.8）至100mL的三角瓶中，加入5.00mL正已烷 （反相用无水乙醇）、10mg2，6-二叔丁基对甲酚（BHT），于90℃水浴中回流45min，取出冷却，用正已 烷（反相用无水乙醇）转移至50mL棕色容量瓶中，稀释定容至刻度，摇匀，得到标准工作溶液b。将标 准工作溶液b按上述色谱条件进样分析，至少做五个平行测定，得维生素D峰面积的平均值A*和预 生素D，峰面积Apre，预维生素D，校正因子f按式（1)计算： f=(A-A*)/(Apre-Apre) ......(1) 式中： A 标准工作溶液a中维生素Ds峰面积； SAG A* 标准工作溶液b中维生素D，峰面积的平均值； Apre 标准工作溶液b中预维生素D，峰面积的平均值： 标准工作溶液a中预维生素D，峰面积。 5.5.2.4定量测定 按照色谱条件，维生素D标准工作溶液及试样溶液用液相色谱测定，得到色谱峰面积响应值，用 外标法定量。 5.5.3结果计算 试样中维生素D（C27H4tO)含量X,[国际单位每克（IU/g），按式（2)计算： (f XAspre +A)XVXC ...(2) mX(fXApre +A) 式中： f 预维生素D，校正因子； Aspre 试液中预维生素D，峰面积； As 试液中维生素D峰面积； V 试液稀释倍数； c 维生素D标准工作溶液a的浓度，单位为国际单位每毫升（IU/mL）； m 试样质量，单位为克（g）； Apre 标准工作溶液a中预维生素D峰面积； A 标准工作溶液a中维生素D峰面积。 试样中维生素D：（C2H4O）含量X，相当于标示量的质量百分数X，按式（3)计算： X, X100 ...(3) 结果用平行测定的算术平均值表示，保留三位有效数字。 5.5.4重复性 在重复性条件下获得的两次独立测定结果与其算术平均值的差值不大于这两个测定值算术平均值 的2.0%。 5.6酸值的测定 称取试样1.0g（精确至0.0001g），按照GB5009.229一2016第三法规定执行。 4 GB7300.202—2019 5.7过氧化值的测定 称取试样2.0g~5.0g（精确至0.0001g），按照GB5009.227规定执行。 5.8重金属的测定 5.8.1试剂与溶液 5.8.1.1 硫酸。注意：硫酸是强腐蚀液，操作者需戴防护眼镜、手套，以防灼伤。 5.8.1.2硝酸。 5.8.1.3盐酸。 5.8.1.4铅标准溶液：1000μg/mL，称取硝酸铅0.1599g，置1000mL量瓶中，加硝酸5mL与水 50mL溶解后，用水稀释至刻度，摇匀，作为备液（按GB/T602的规定）。 5.8.1.5氨水溶液（10%）：取氨水40mL，加水适量使成100mL，摇匀（按GB/T603制备）。 5.8.1.6盐酸溶液Ⅲ：取盐酸63mL，加水适量使成100mL，摇匀。 5.8.1.7盐酸溶液IV：取盐酸18mL，加水适量使成100mL，摇匀。 5.8.1.8硫化钠溶液：取硫化钠100g，加水使溶解成1000mL。 5.8.1.9醋酸盐缓冲液（pH3.5）：取醋酸铵25g，加水25mL溶解，加盐酸溶液Ⅲ（5.8.1.6)38mL，用盐 摇匀。 5.8.1.10酚酞指示液：取酚1g，加乙醇100mL使溶解，即得（按GB/T603制备）。变色范围pH8.3~ 10.0（无色→红）。 5.8.1.11铅标准工作液：精密量取铅标准溶液（5.8.1.4）2mL，置200mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇 匀（每毫升相当于10ug的Pb）。 5.8.2分析步骤 5.8.2.1试样溶液制备 称取试样1g（精确至1mg），置瓷中，缓缓炽灼至完全炭化，放冷。加硫酸（5.8.1.1)0.5mL~ 1mL使湿润，低温加热至硫酸蒸气除尽后，在550℃炽灼使完全灰