ICS 65.120 B 46 中华人民共和国国家标准 GB 7302—2018 代替GB/T7302—2008 饲料添加剂 叶酸 Feed additiveFolic acid 2020-01-01实施 2018-12-28发布 国家市场监督管理总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB7302—2018 前言 本标准的第1章、第4章和第6章为强制性的，其余为推荐性的。 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则编写。 本标准代替GB/T7302—2008《饲料添加剂叶酸》。 本标准与GB/T7302—2008相比主要技术差异是： 外观和性状增加了微小颗粒（见4.1)； 将干燥失重改为水分，测定方法采用卡尔费休测定法（见4.2）； 一增加了重金属（以Pb计）不大于10.0mg/kg的要求（见4.2）； 增加了总砷不大于2.0mg/kg的要求（见4.2）。 本标准由中华人民共和国农业农村部提出并归口。 本标准起草单位：国家饲料质量监督检验中心（武汉）、帝斯曼维生素（上海）有限公司。 本标准主要起草人：刘小敏、张进、高利红、肖平、王峻、王思思、高俊峰、黄婷 GB/T7302—2008的历次版本发布情况为： GB7302—1987。 1 GB 7302—2018 饲料添加剂 厂叶酸 1范围 本标准规定了饲料添加剂叶酸的要求、试验方法、检验规则及标签、包装、运输、贮存等。 本标准适用于化学合成法制得的饲料添加剂叶酸 2 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 601 化学试剂 标准滴定溶液的制备 化学试剂 GB/T 602 杂质测定用标准溶液的制备 GB/T 603 化学试剂 试验方法中所用制剂及制品的制备 GB/T 606 化学试剂 水分测定通用方法卡尔·费休法 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB 10648 饲料标签 GB/T 13079 饲料中总砷的测定 GB/T14699.1 饲料采样 3 3化学名称、分子式、相对分子质量和结构式 分子式：C,HiN,O 相对分子质量：441.40（以C1gHigN，O。计，按2016年国际相对原子质量表计算） 结构式： SZAG CH,N HOOCCCH,CH, -COON 4要求 4.1 外观和性状 本品为黄色或橙黄色结晶性粉末或微小颗粒，无臭、无味。在水、乙醇、内酮、三氯甲烷或乙醚中不 溶，在氢氧化碱或碳酸钠的稀溶液中溶解。 1 GB7302—2018 4.2 技术指标 饲料添加剂叶酸的技术指标应符合表1要求。 表1技术指标 项目 指标 叶酸（以CtHigN,O。干基计）/% 95.0~102.0 水分/% 8.5 炽灼残渣/% 0.5 重金属（以Pb计)/（mg/kg) 10.0 总砷/(mg/kg) 2.0 5试验方法 除特殊说明外，所有使用的试剂均为分析纯，色谱和光谱所用水应符合GB/T6682中一级水规定， 其他实验用水应符合GB/T6682中二级水规定，试剂和溶液的制备应符合GB/T601、GB/T602和 GB/T603的规定。 5.1 外观和性状检查 取适量的样品置于清洁、干燥的白瓷盘中，在自然光线下观察其色泽和形态，并其气味 5.2 鉴别试验 5.2.1 试剂和材料 5.2.1.1 氢氧化钠溶液：c(NaOH)=0.1moL/L。 5.2.1.2 高锰酸钾溶液：c（KMnO,）=0.1moL/L。 5.2.2 仪器设备 5.2.2.1 分光光度计 5.2.2.2 分析天平：感量为0.0001g。 5.2.3 鉴别方法 5.2.3.1 称取适量试样（约2mg），加氢氧化钠溶液10mL，振摇使溶解，加高锰酸钾溶液1滴，振摇混 匀后，溶液显蓝绿色，在紫外光灯下，显蓝绿色荧光 5.2.3.2取样后，加氢氧化钠溶液制成每1mL中含10μg样品的溶液，用分光光度计测定，在256nm ±1nm、283nm士2nm及365nm士4nm的波长处有最大吸收。吸收度256nm与吸收度365nm的 比值应为2.8~3.0。 5.3叶酸含量测定 5.3.1内标法（仲裁法） 5.3.1.1试剂和材料 5.3.1.1.1 磷酸二氢钾：优级纯。 2 GB7302—2018 5.3.1.1.2氢氧化钾溶液：c(KOH)=0.1mol/L。 5.3.1.1.3甲醇：色谱纯。 5.3.1.1.4 氨水溶液：（5十95）。 5.3.1.1.5 烟酰胺内标液：取烟酰胺适量，加水溶解并稀释制成1.0mg/mL的溶液。 5.3.1.1.6流动相：称取6.8g磷酸二氢钾，加入70mL氢氧化钾溶液（5.3.1.1.2），用水稀释成约 5.3.1.1.7标准溶液：准确称取叶酸对照品（叶酸纯度≥91.4%，以CigHi.N,O。计）21.9mg，精确到 0.0001g。置于100mL容量瓶中，加入0.5%氨溶液约60mL溶解，准确加入烟酰胺内标液（5.3.1.1.5） 20mL，用0.5%氨溶液稀释至刻度，摇匀。此标准溶液每1mL含叶酸200μg，现配现用。 5.3.1.21 仪器设备 5.3.1.2.1 分析天平：感量为0.0001g和0.00001g。 5.3.1.2.2 超声波清洗器。 5.3.1.2.3 酸度计。 5.3.1.2.4 液相色谱仪，配紫外检测器或二极管阵列检测器。 5.3.1.3 试验步骤 5.3.1.3.1 试样溶液制备 （5.3.1.1.4)置于超声波清洗器超声，溶解，定容；精确移取10.0mL溶液，加入烟酰胺内标液（5.3.1.1.5） 20.0mL，用氨水溶液（5.3.1.1.4）稀释至刻度，摇匀。 5.3.1.3.2试验 5.3.1.3.2.1参考色谱条件 参考色谱条件如下： 色谱柱：Cls色谱柱，粒度5μm，柱长250mm，内径4mm不锈钢柱或性能相当者， 流动相：4.3.1.1.6； —流速：1.0mL/min; 一柱温：室温； 进样量：10μL~20μL； 一检测波长：254nm。 5.3.1.3.2.2预试验 5.3.1.3.2.2.1叶酸与内标物质峰的分离度应大于1.5。 5.3.1.3.2.2.2 2取叶酸标准溶液，连续进样5次，其峰面积测量值的相对偏差应不大于2.0%。 5.3.1.3.2.3定量试验 取标准溶液（5.3.1.1.7)及试样溶液（5.3.1.3.1），分别连续进样3次~5次按峰面积计算校正因子， 并用其平均值计算试样中叶酸含量。 5.3.1.4试验数据处理 叶酸含量（以CigHiN,O。干基计）W1以质量分数表示，数值以百分数（%）计，按式（1）、式（2） 计算： 3 GB 7302—2018 A Xm X 100 ...(1) A,Xm2 ...(2) 式中： f 叶酸质量校正因子； At 标准溶液中内标物质峰面积； A2 标准物质中叶酸对照品峰面积； A: 试样溶液中叶酸的峰面积； A4 试样溶液中内标物的峰面积； mi 标准溶液中内标物的质量，单位为克（g）； m2 标准溶液中叶酸的质量，单位为克（g）； m3 试样溶液中叶酸的质量，单位为克（g）； m4 试样溶液中内标物的质量，单位为克（g）； W3 按5.4测定试验样品的水分质量分数的数值，数值以百分数（%）表示。 5.3.1.5 精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不大于2.0%。 5.3.2外标法 5.3.2.1试剂或材料 5.3.2.1.1 磷酸二氢钾：优级纯。 5.3.2.1.2 磷酸氢二钾：优级纯 5.3.2.1.3 氢氧化钾溶液：c(KOH)=0.1mol/L。 5.3.2.1.4甲醇：色谱纯。 5.3.2.1.5 5流动相：称取19.64g磷酸二氢钾和9.68g磷酸氢二钾溶于水中，倒人2L容量瓶中，加入 240mL甲醇，用水定容至刻度，用氢氧化钾溶液（5.3.2.1.3）调节pH至6.5。 5.3.2.1.6标准溶液：准确称取叶酸对照品（叶酸纯度≥91.4%，以C1gH1N，O计）21.9mg，置于100 mL容量瓶中，加人1.8mL氢氧化钾溶液（5.3.2.1.3）和10.0mL流动相（5.3.2.1.5）溶解，然后用流动相 （5.3.2.1.5）定容至刻度。此标准溶液每1mL含叶酸200μg，现配现用。 5.3.2.2 仪器设备 同5.3.1.2。 5.3.2.3 试验步骤 5.3.2.3.1 试样溶液的制备 称取试样适量（约相当于叶酸0.2g，精确到0.0002g），精确到0.0001g。置于100mL容量瓶中，加 1.8mL氢氧化钾溶液（5.3.2.1.3）和10.0mL流动相（5.3.2.1.5）溶解，然后用流动相（5.3.2.1.5）定容至刻度。 准确移取10.0mL溶液，用流动相（5.3.2.1.5）稀释至100mL，摇匀。 5.3.2.3.2试验 5.3.2.3.2.1参考色谱条件 参考色谱条件如下： 4 GB 7302—2018 色谱柱：ODSCi柱，粒度4μm，150mm×3.9mm或性能相当者； 流动相：5.3.2.1.5； 流速：0.6mL/min； 柱温：30℃； 进样量：10μL； 检测波长：280nm。 5.3.2.3.2.2 预试验 取叶酸标准溶液，连续进样5次，其峰面积测量值的相对偏差应不大于2.0%。 5.3.2.3.2.3 定量试验 取标准溶液（5.3.2.1.6）及试样溶液（5.3.2.3.1），分别连续进样，按外标法以峰面积计算 5.3.2.4试验数据处理 叶酸含量（以C1H19N，O。干基计）w2以质量分数表示，数值以百分数（%）计。按式（3）计算： A,×c×V .(3) 式中： A5—试样溶液中叶酸的峰面积； A。—标准物质中叶酸对照品峰面积； 稀释体积，单位为毫升（mL）； ms- 试样溶液中叶酸的质量，单位为克（g）； 标准溶液中叶酸的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL)； 按5.4测定试验样品的水分质量分数的数值，数值以百分数（%）表示。 W3 试验结果以两次平行测定结果的算术平均值表示，结果保留至小数点后一位。 5.3.2.5 精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定的绝对差值不大于2.0%。 5.4水分的测定 按GB/T606的规定执行。 5.5炽灼残渣的测定 5.5.1 试剂或材料 5.5.1.1 硫酸。 5.5.2 仪器设备 5.5.2.1 分析天平：感量为0.0001g。 5.5.2.2 马福炉。 5.5.3 试验步骤 准确称取样品2.0g，精确到0.0002g。置于已在700℃土50℃灼烧至恒重的瓷埚中，用小火缓 缓加热至完全炭化，放冷后，加硫酸0.5mL1mL使湿润，低温加热至硫酸蒸气除尽后，移入马福炉 中，在700℃士50℃灼烧至恒重