ICS 65.120 B 46 中华人民共和国国家标准 GB 9454—2017 代替GB/T9454—2008 饲料添加剂 DL-α-生育酚乙酸酯 Feed additiveDL-α-Tocopheryl acetate 2017-10-14发布 2018-05-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB 9454—2017 前言 本标准的第1章、第3章和第5章为强制性的，其余为推荐性的。 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准代替GB/T9454—2008《饲料添加剂维生素E》。 本标准与GB/T9454—2008相比，主要技术内容差异如下： 标准名称由《饲料添加剂维生素E》更改为《饲料添加剂DL-α-生育酚乙酸酯》； DL-α-生育酚乙酸酯含量由≥92.0%修改为≥93.0%； 一酸度由原1g试样消耗的0.1mol/L氢氧化钠不得超过2.0mL修改为1g试样消耗的 0.1mol/L氢氧化钠不得超过1.0mL； 增加了卫生指标砷要求及相应的测定方法； 一增加了比旋度和色谱峰鉴别； 一原标准第一法（仲裁法）仅保留毛细管柱气相色谱法，删除了填充柱气相色谱法，并将内标物更 改为十六酸十六酯； 毛细管柱气相色谱法色谱条件中增加了分流比20：1，流速改为2mL/min，柱温改为270℃~ 280℃; DL-α-生育酚乙酸酯含量、折光率、比旋度、吸收系数、酸度和生育酚为出厂检验项目”。 本标准由全国饲料工业标准化技术委员会（SAC/TC76）提出并归口。 股份有限公司、浙江医药股份有限公司。 本标准主要起草人：张志健、武玉波、朱聪英、任玉琴、周丰超、施杏芬、吴望君、蒋音、杨金枢、胡建权、 姜红军。 本标准所代替标准的历次版本发布情况为： GB/T9454—1998,GB/T9454—2000,GB/T9454—2008。 1 GB 9454—2017 饲料添加剂 DL-α-生育酚乙酸酯 1范围 本标准规定了饲料添加剂DL-α-生育酚乙酸酯的要求、试验方法、检验规则以及标签、包装、运输、 贮存和保质期。 本标准适用于以异植物醇为主原料，经化学合成制得的饲料添加剂DL-α-生育酚乙酸酯。 化学名：DL-2,5，7,8-四甲基-2-（4，8，12-三甲基十三烷基）-6-苯并二氢吡喃醇乙酸酯 分子式：C3H52O 相对分子质量：472.74（按2007年国际相对原子质量） 结构式： 11:C 1130 Cll CH3 CII, 2 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有修改单）适用于本文件。 GB/T 601 化学试剂标准滴定溶液的制备 GB/T 603 化学试剂试验方法中所用制剂及制品的制备 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB 10648 饲料标签 GB/T 14699.1 饲料采样 3要求 3.1 外观和性状 本品为微绿黄色或黄色的黏稠液体，几乎无臭，遇光色渐变深；本品在无水乙醇、丙酮、乙醚或石油 醚中易溶，在水中不溶。 3.2 2技术指标 技术指标应符合表1的要求 1 GB9454—2017 表1 技术指标 项 指 目 标 DL-α-生育酚乙酸酯含量/% ≥93.0 比旋度 。5000 折光率（n） 1.494~1.499 吸收系数（284nm）（Elcm） 41.0~45.0 酸度（消耗0.1mol/L氢氧化钠滴定液的体积）/mL ≤1.0 生育酚（消耗0.01mol/L硫酸铈滴定液的体积)/mL 1.0 重金属（以Pb计）/（mg/kg） 总砷（As)/(mg/kg) 3 4试验方法 除特殊说明外，所用试剂均为分析纯；色谱和光谱分析中所用水应符合GB/T6682中一级水的规 定，其他试验用水符合GB/T6682中三级水的规定；试剂和溶液的制备应符合GB/T601和GB/T603 的规定。 4.1 感官检验 取适量样品置于清洁、干燥的白瓷盘中，在自然光线下观察其色泽和形态，并嗅其气味。 AC 4.2 鉴别 4.2.1 试剂和溶液 4.2.1.1 无水乙醇。 4.2.1.2 乙醇。 4.2.1.3 硝酸。 4.2.1.4 乙醚。 4.2.1.5 溴化钾（光谱纯）。 4.2.1.6 2，2°-联吡啶的乙醇溶液：称取2,2'-联吡啶0.5g，加乙醇（4.2.1.2)100mL使溶解。 4.2.1.7 三氯化铁的乙醇溶液：称取三氯化铁0.1g，加乙醇（4.2.1.2）50mL使溶解。 4.2.1.8 氢氧化钾的乙醇溶液：取氢氧化钾3.5g，置锥形瓶中，加乙醇适量使溶解并稀释成100mL，用 橡皮塞密塞，静置24h后，迅速倾取上清液，置于具橡皮塞的棕色玻瓶中 4.2.2 仪器和设备 4.2.2.1 红外分光光度计。 4.2.2.2 旋光仪。 4.2.2.3 分析天平，感量0.1mg和0.01mg。 4.2.3 鉴别方法 4.2.3.1 称取试样约30mg，加无水乙醇（4.2.1.1)10mL溶解后，加硝酸（4.2.1.3）2mL，摇匀，在75℃ 2 GB 9454—2017 水浴中加热约15min，溶液显橙红色 4.2.3.2称取试样约10mg，加氢氧化钾的乙醇溶液（4.2.1.8）2mL，煮沸5min，放冷，加水4mL与乙 醚（4.2.1.4）10mL，振摇，静置使分层；取乙醚层2mL，加2，2-联吡啶的乙醇溶液（4.2.1.6）数滴与三氯 化铁的乙醇溶液（4.2.1.7）数滴，应显血红色 4.2.3.3红外鉴别：试样用溴化钾（4.2.1.5)压片，在红外分光光度计上测量。试样的红外吸收图谱应与 标准品的图谱一致（标准品图谱可参见附录A） 4.2.3.4比旋度 4.2.3.4.1试样溶液制备 准确称取2.50g试样，用无水乙醇（4.2.1.1）溶解并在20℃士0.5℃下恒温定容至25mL，摇匀。 4.2.3.4.2测定步骤 在室温20℃土0.5℃下，将测定管用无水乙醇（4.2.1.1）冲洗数次后再缓缓注人无水乙醇（4.2.1.1) 适量（注意不要产生气泡），置于旋光仪内校正零点，同法将试样溶液（4.2.3.4.1）置于旋光仪内读取旋光 度，准确至0.01°，左旋以负号一”表示，右旋以正号“十”表示。重复读取3次，取平均值，计算试样中的 比旋度。 DL-α-生育酚乙酸酯在20℃、钠光谱的D线（589.3nm）的比旋度[αJB按式（1)计算： [aJb=ixc :100α ...(1) 式中： α试样溶液的旋光度； 1一测定管的长度，单位为分米（dm）； c一一每100mL试样溶液中含有被测物质的质量，单位为克（g）。 4.2.3.5在含量测定项（4.3）下记录的色谱图，供试品溶液的DL-α-生育酚乙酸酯色谱主峰保留时间应 与对照品溶液的一致。 4.3DL-α-生育酚乙酸酯含量 4.3.1试剂和溶液 4.3.1.1 甲醇（色谱纯）。 4.3.1.2 2正已烷（色谱纯）。 4.3.1.3十六酸十六酯（色谱纯）。 4.3.1.4DL-α-生育酚乙酸酯标准品：含量≥98%。 4.3.1.5内标溶液：称取十六酸十六酯（4.3.1.3）适量，加正已烷（4.3.1.2）溶解并稀释成每毫升中含有 3.0mg的溶液，摇匀。 4.3.1.6标准溶液I（气相法）：称取DL-α-生育酚乙酸酯标准品（4.3.1.4）适量（精确至0.01mg），置棕 色具塞瓶中，加入内标溶液（4.3.1.5）使溶解并稀释成含DL-α-生育酚乙酸酯约2mg/mL的标准溶液 4.3.1.7标准溶液Ⅱ（液相法）：称取DL-α-生育酚乙酸酯标准品（4.3.1.4）约20mg（精确至0.01mg）， 置50mL棕色容量瓶中，加甲醇（4.3.1.1）适量溶解，并定容至刻度.摇勾 4.3.2仪器和设备 4.3.2.1分析天平：感量0.1mg和0.01mg。 4.3.2.2气相色谱仪：配氢火焰离子化检测器（FID）。 4.3.2.3 3高效液相色谱仪：配置紫外检测器（UV)和柱温箱。 4.3.2.4超声波清洗器。 3 GB 9454—2017 4.3.3第一法 气相色谱法（仲裁法） 4.3.3.1试样溶液制备 称取试样适量（精确至0.01mg），置棕色具塞瓶中，精密加人内标溶液（4.3.1.5）使溶解并稀释成含 DL-α-生育酚乙酸酯约2 mg/mL的溶液 4.3.3.2参考色谱条件与系统适用性试验 4.3.3.2.1参考色谱条件 参考色谱条件如下： 色谱柱：用100%二甲基聚硅氧烷为固定相的毛细管柱，30m（长度）×0.25mm（内径）X 0.25μm~0.35μm（膜厚），或相当者； 一柱箱温度：270℃~280℃； 一进样口温度：290℃~300℃； 检测器温度：290℃~300℃； 一载气：氮气，纯度≥99.999%，流速2mL/min； 分流比：20：1； GAG 进样量：1μL。 4.3.3.2.2 2系统适用性试验 取标准溶液I（4.3.1.6），按色谱条件（4.3.3.2.1）注入气相色谱仪，记录色谱图。理论塔板数按DL α-生育酚乙酸酯计算应不低于5000,DL-生育酚乙酸酯峰与内标物峰的分离度应大于3(DL-α-生育酚 乙酸酯标准溶液的毛细管气相色谱图参见附录B中的图B.1）。 4.3.3.3测定步骤 取标准溶液I（4.3.1.6）及试样溶液（4.3.3.1），分别连续注样3次～5次，按峰面积计算校正因子， 并用其平均值计算试样中DL-α-生育酚乙酸酯的含量。 4.3.3.4结果计算与表示 DL-α-生育酚乙酸酯含量X，以质量分数（%）表示，按式（2）、式（3）计算： AiXmi XPst ..(2) A,Xm2 AXm3 XI=fX ...(3) AXm4 式中： f DL-α-生育酚乙酸酯的质量校正因子； DL-α-生育酚乙酸酯标准品纯度，%； A,——标准溶液中内标物的峰面积； -标准溶液中DL-α-生育酚乙酸酯的峰面积； As—试样溶液中DL-α-生育酚乙酸酯的峰面积; Ai 试样溶液中内标物的峰面积； mi -DL-α-生育酚乙酸酯标准品的质量，单位为克（g）； m2 标准溶液中内标物的质量，单位为克（g）； 4 GB 9454—2017 m3——试样溶液中内标物的质量，单位为克（g）； m4——试样的质量，单位为克（g）。 以两次平行测定结果的算术平均值为测定结果，结果保留3位有效数字，两次平行测定的绝对差值 应不大于其算术平均值的3%。 4.3.4第二法高效液相色谱法 4.3.4.1试样溶液制备 称取试样约20mg（精确至0.01mg），置50mL棕色容量瓶中，加甲醇（4.3.1.1）约40mL，置超声 波清洗器中超声溶解10min，冷却至室温，用甲醇（4.3.1.1）定容至刻