ICS 65.120 B 46 中华人民共和国国家标准 GB/T13089—2020 代替GB/T13089—1991 饲料中噁唑烷硫酮的测定方法 Method for determination of oxazolidinethione infeeds 2020-11-19发布 2021-06-01实施 国家市场监督管理总局 发布 国家标准化管理委员会 GB/T13089—2020 前言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草 本标准代替GB/T13089—1991《饲料中嗯唑烷硫酮的测定方法》。 本标准与GB/T13089一1991相比，除编辑性修改外，主要技术内容差异如下： 修改了方法的适用范围，增加了定量限（见第1章，1991年版的第1章）； 修改了方法的原理（见第3章，1991年版的第2章）； 修改了白芥子酶的制备方法（见4.10，1991年版的3.4）； 修改了白芥子酶的用量和试验步骤（见第7章，1991年版的第6章）； 修改了试验数据处理（见第8章，1991年版的第7章）； 修改了精密度（见第9章，1991年版的第7章）。 本标准由全国饲料工业标准化技术委员会（SAC/TC76）提出并归口。 本标准起草单位：四川威尔检测技术股份有限公司、中国农业科学院北京畜牧兽医研究所、广东省 农业科学院农产品公共监测中心、通威股份有限公司、中国饲料工业协会。 本标准主要起草人：张凤秤、佟建明、王威利、雷宝良、杨发树、王黎文、宋涛、卢加文。 本标准所代替标准的历次版本发布情况为： GB/T13089—1991。 1 GB/T13089—2020 饲料中噁唑烷硫酮的测定方法 1范围 本标准规定了饲料中嗯唑烷硫酮的紫外分光光度测定方法。 本标准适用于菜籽及其加工产品，以及含有菜籽及其加工产品的配合饲料、浓缩饲料和精料补充料 中唑烷硫酮的测定 本标准方法的定量限为150mg/kg。 2规范性引用文件 2 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件 GB/T5520粮油检验发芽试验 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T20195动物饲料试样的制备 3原理 试样中的硫代葡萄糖苷在pH7.0缓冲液中，在白芥子酶作用下水解生成异硫氰酸酯，用二氯甲烷 萃取后，带羟基的异硫氰酸酯与乙醇反应，环化生成唑烷硫酮，用紫外分光光度法测定 4 试剂或材料 除非另有规定，仅使用分析纯试剂。 4.1水：GB/T6682，二级。 4.2石油醚（沸程30℃～60℃）。 4.3二氯甲烷。 4.4无水乙醇。 50 4.5柠檬酸溶液（0.1mol/L)：准确称取4.20g柠檬酸（C,H.O，·HzO)溶解于水中，用水稀释并定容 至200mL，混匀。临用现配。 4.6磷酸氢二钠（0.2mol/L）：准确称取28.39g无水磷酸氢二钠（NazHPO.）溶解于水中，用水稀释并 定容至1L，混匀。临用现配。 4.7盐酸（0.01mol/L）：准确移取0.9mL浓盐酸，用水稀释并定容至1L，混匀。 4.8氢氧化钠溶液（0.01mol/L）：准确称取0.40g氢氧化钠加水溶解，用水稀释并定容至1L，混匀。 4.9pH7.0缓冲溶液：量取176.5mL柠檬酸溶液（4.5）于1000mL容量瓶中，用磷酸氢二钠溶液（4.6） 稀释并定容至1000mL，混匀，用盐酸溶液（4.7)或氢氧化钠溶液（4.8）调整pH至7.0。临用现配。 4.10白芥子酶：称取50g白芥（SinapisalbaL.）种子（按照GB/T5520做发芽率试验，72h内发芽率 须大于85%，保存期不超过两年）粉碎后，置于500mL烧杯中，加入100mL石油醚（4.2），搅拌2min， 静置，弃去上层液体，重复脱脂10次，使脂肪含量低于2%，置通风橱内使溶剂挥干，然后再粉碎一次， 1 GB/T13089—2020 80%通过0.28mm试验筛，装在密闭容器中，置于一18℃以下保存，有效期为6个月。为保证白芥子 酶活性，制备过程中环境温度应保持在30℃以下，两次粉碎注意少量多次，防止粉碎机过热 5仪器设备 5.1紫外可见分光光度计：配备10mm石英比色皿。 5.2分析天平：感量为0.01g、0.0001g。 5.3实验用样品粉碎机。 5.4电热恒温干燥箱：控温精度士2.0℃。 5.5旋涡混合仪。 5.6恒温水浴：控温精度士1.0℃。 5.7高速冷冻离心机：可控制在20℃以下，不低于5000r/min。 5.8振荡器：往复式，200次/min。 5.9 微量移液器：50uL。 6样品 6.1 菜籽饼粕、配合饲料、浓缩饲料和精料补充料 按照GB/T20195规定制备试样，至少200g，粉碎使其全部过0.28mm分析筛，混合均匀，装人密 闭容器中，备用。 6.2 油菜籽 按照GB/T20195规定制备试样。取至少100g试样，根据试样特性和粉碎机性能设定粉碎时间 和速度，粉碎不应引起仁壳分离，试样不应出油，使其通过1.0mm分析筛，混合均匀，装人密闭容器中， 备用。如果试样水分大于10%，应先将试样在不高于80℃烘箱中烘干，使其水分达到10%以下。若不 立即制备样品，应将烘干后的试样置于广口瓶中密闭保存。 7试验步骤 7.1试样溶液制备 平行做两份试验。准确称取预先于103℃土2℃干燥至恒重的试样0.2g（精确到0.0001g）试样 于35℃士1.0℃恒温水浴中酶解反应2h，取出冷却至室温，准确加入2.5mL二氯甲烷，涡旋混合 1min，室温下200次/min振荡提取30min，于20℃下5000r/min离心20min。准确移取6mL无水 乙醇于具塞试管中，用微量移液器准确移取离心管下层有机相溶液50uL，加人到装有无水乙醇的具塞 试管中，盖上塞，涡旋混合1min，将具塞试管放入恒温水浴中，50℃士1.0℃下加热反应30min，冷却 至室温，所得溶液为试样溶液。 同时做空白试验，除不加试样外，空白试验采用与试样完全相同的试验步骤。 7.2测定 在仪器最佳条件下，将试样溶液加入10mm比色皿中，以空白试验溶液为空白对照，用紫外分光光 度计分别于235nm、245nm和255nm波长处测定试样溶液的吸光度值。 2 GB/T13089—2020 8 3试验数据处理 试样中唑烷硫酮（以5-乙烯基-2-唑烷硫酮计）的含量以质量分数表示，单位为毫克每千克 （mg/kg，以干基计），按公式（1)计算： 4.42 W=(A245 - X1000 2 m 式中： A235 试样溶液在235nm处的吸光度值； A245 试样溶液在245nm处的吸光度值； A255 试样溶液在255nm处的吸光度值； m 试样的质量，单位为克（g)； 4.42 单位校正吸光度值所代表的5-乙烯基-2-唑烷硫酮的质量，单位为毫克（mg）； 1000 质量单位换算。 测定结果以平行测定的算术平均值表示，保留3位有效数字。 精密度 在重复性条件下，两次独立测定结果与其算术平均值的绝对差值不大于该算术平均值的10%。 GB/T13089—2020 8 3试验数据处理 试样中唑烷硫酮（以5-乙烯基-2-唑烷硫酮计）的含量以质量分数表示，单位为毫克每千克 （mg/kg，以干基计），按公式（1)计算： 4.42 W=(A245 - X1000 2 m 式中： A235 试样溶液在235nm处的吸光度值； A245 试样溶液在245nm处的吸光度值； A255 试样溶液在255nm处的吸光度值； m 试样的质量，单位为克（g)； 4.42 单位校正吸光度值所代表的5-乙烯基-2-唑烷硫酮的质量，单位为毫克（mg）； 1000 质量单位换算。 测定结果以平行测定的算术平均值表示，保留3位有效数字。 精密度 在重复性条件下，两次独立测定结果与其算术平均值的绝对差值不大于该算术平均值的10%。 GB/T13089—2020 8 3试验数据处理 试样中唑烷硫酮（以5-乙烯基-2-唑烷硫酮计）的含量以质量分数表示，单位为毫克每千克 （mg/kg，以干基计），按公式（1)计算： 4.42 W=(A245 - X1000 2 m 式中： A235 试样溶液在235nm处的吸光度值； A245 试样溶液在245nm处的吸光度值； A255 试样溶液在255nm处的吸光度值； m 试样的质量，单位为克（g)； 4.42 单位校正吸光度值所代表的5-乙烯基-2-唑烷硫酮的质量，单位为毫克（mg）； 1000 质量单位换算。 测定结果以平行测定的算术平均值表示，保留3位有效数字。 精密度 在重复性条件下，两次独立测定结果与其算术平均值的绝对差值不大于该算术平均值的10%。