ICS 67.180.10 CCS X 31 中华人民共和国国家标准 GB/T 40152—2021 蜂蜜中蔗糖转化酶的测定 分光光度法 Determination of saccharase activity in honey- Spectrophotometric method 2021-05-21发布 2021-12-01实施 国家市场监督管理总局 发布 国家标准化管理委员会 GB/T 40152—2021 前言 本文件按照GB/T1.1一2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任 本文件由中华全国供销合作总社提出。 本文件由全国蜂产品标准化工作组（SAC/SWG2）归口。 本文件起草单位：江苏中谱检测有限公司。 本文件主要起草人：徐锦忠、羊细群、鲁惠玲、王英俊、陈梅、王燕、王敏、姚超。 1 GB/T 40152—2021 蜂蜜中蔗糖转化酶的测定 分光光度法 1范围 本文件规定了蜂蜜中蔗糖转化酶的分光光度测定方法。 本文件适用于蜂蜜中蔗糖转化酶的测定。 2规范性引用文件 2 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文 本文件。 GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4方法原理 蜂蜜中所含有的蔗糖转化酶能将底物对硝基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷定量转化为对硝基苯酚，通过测 定特定波长下吸光度值确定对硝基苯酚含量来测定蜂蜜中蔗糖转化酶。将蜂蜜溶液加人到底物溶液 中，混合均匀，在40℃条件下反应20min后，添加终止溶液终止反应，于400nm波长下，测定吸光度， 吸光度值与蔗糖转化酶值成正比。同时做空白对照， 5 试剂和材料 除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的三级水。 5.1磷酸二氢钾（KH,PO,）。 5.2二水合磷酸氢二钠（NazHPO,·2H,O) 5.3对硝基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷（CASNO.3767-28-0）。 5.4三羟甲基氨基甲烷Tris。 5.5 0.1mol/L的磷酸盐缓冲液（pH为6.0）。 称取11.66g磷酸二氢钾和2.56g二水合磷酸氢二钠（NazHPO,·2HO)，加水溶解，稀释至1L。 5.60.02mol/L底物溶液（pH为6.0）。 称取6.025g对硝基苯-α-D-吡哺葡萄糖苷，加人磷酸盐缓冲液（5.5）约900mL溶解，必要时加热至 60℃助溶，并冷却至室温，稀释至1L，4℃避光保存，有效期7d。 5.73mol/L终止溶液。 1 GB/T40152—2021 称取363.4g三羟甲基氨基甲烷，加入900mL水溶解后，用3mol/LHCl调节pH至9.5，用水稀 释至1L。 6仪器和设备 6.1紫外可见分光光度计。 6.2分析天平：感量0.1mg.0.01g。 6.3涡旋混匀器。 6.4pH计：精度±0.02。 6.5恒温水浴锅：温度控制精度士0.1℃。 6.6容量瓶：25mL（A级）。 6.7 移液管1mL、5mL。 6.8 3定时器：精确度5s。 6.9 9试管：10mL。 7试样的制备与保存 样品为均匀无杂质的液体或结晶蜂蜜。对于有结晶的蜂蜜，于40℃以下融化，混合均匀后待测。 8测定步骤 8.1 样品的制备：称取4g（精确至0.01g）蜂蜜于25mL容量瓶中，加人15mL磷酸盐缓冲液（5.5），充 分摇匀溶解，用磷酸盐缓冲液（5.5）定容至刻度，涡旋混合均匀，冷藏保存备用，有效期为1d。 8.2用移液管分别移取5mL底物溶液（5.6）于两支试管中，将两支试管同时置于40℃水浴锅中预热 5min后，一支试管准确加入0.5mL样品溶液（8.1），另一支空白对照试管不加样品溶液，计时，迅速涡 混合均匀。于波长400nm处分别测样品溶液以及空白对照溶液的吸光度。 9结果计算 试样中的蔗糖转化酶值按式（1）进行计算： X=(Ar-A.)X198.68 .(1) 式中： X—一样品的蔗糖转化酶值，单位为标准单位每千克（U/kg）； A，一一样品溶液在波长400nm下的吸光度； A。—空白对照溶液在波长400nm下的吸光度。 结果保留至小数点后一位。 10精密度 SZIG 蔗糖转化酶值10U/kg时，在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术 2 GB/T 40152—2021 平均值的15%； 蔗糖转化酶值≤10U/kg时，在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术 平均值的25%。 GB/T 40152—2021 平均值的15%； 蔗糖转化酶值≤10U/kg时，在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术 平均值的25%。 GB/T 40152—2021 平均值的15%； 蔗糖转化酶值≤10U/kg时，在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术 平均值的25%。