ICS 65.120 B 46 中华人民共和国国家标准 GB/T 6437—2018 代替GB/T6437—2002 饲料中总磷的测定 分光光度法 Determination of phosphorus in feedsSpectrophotometry 2019-04-01实施 2018-09-17发布 国家市场监督管理总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T 6437—2018 前言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草 本标准代替GB/T6437一2002《饲料中总磷的测定分光光度法》。 本标准与GB/T6437—2002相比，主要技术内容修改如下： 删除范围中“除磷酸盐外”的内容（见第1章，2002年版的第1章）； 增加了检出限和定量限（见第1章）； 修订了磷测定方法原理的表述（见第3章，2002年版的第3章）； 一增加了磷标准贮备液保存期（见4.4）； 修改了采样和试样制备方法（见第6章，2002年版的第6章）； 删除干灰化法中“不适用于含磷酸二氢钙[Ca（H,PO4）2的饲料”的内容（见7.1.1,2002年版 的 7.1.1) ; 修订了标准曲线的范围，由原来的"0μg/mL～16μg/mL"改为"0μg/mL～15ug/mL”（见 7.2，2002年版的7.2）。 本标准由全国饲料工业标准化技术委员会（SAC/TC76)提出并归口。 本标准起草单位：上海市兽药饲料检测所。 本标准主要起草人：商军、华贤辉、黄士新、陆淳、曹莹、田恺、张浩然、孙冰清。 本标准所代替标准的历次版本发布情况为： GB/T6437—1992、GB/T6437—2002。 GB/T6437—2018 饲料中总磷的测定 分光光度法 1范围 本标准规定了饲料中总磷含量测定的分光光度法。 本标准适用于饲料原料及饲料产品中磷的测定。 当取样量5g，定容至100mL时，检出限为20mg/kg，定量限为60mg/kg。 2规范性引用文件 2 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T601化学试剂标准滴定溶液的制备 GB/T 602 化学试剂杂质测定用标准溶液的制备 GB/T603化学试剂试验方法中所用制剂及制品的制备 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T14699.1饲料采样 GB/T20195动物饲料试样的制备 3原理 试样中的总磷经消解，在酸性条件下与钒钼酸铵生成黄色的钒钼黄［(NH,),PO,NH,VO· 16Mo0］络合物。钒钼黄的吸光度值与总磷的浓度成正比。在波长400nm下测定试样溶液中钒钼黄 的吸光度值，与标准系列比较定量。 4试剂或材料 本标准所用试剂和水，在没有注明其他要求时，均指分析纯试剂和GB/T6682中规定的三级水。 试验中所用标准滴定溶液、杂质测定用标准溶液、制剂及制品，在没有注明其他要求时，均按GB/T601、 GB/T602、GB/T603的规定制备。试验中所用溶液在未注明用何种溶剂配制时，均指水溶液。 4.1硝酸。 4.2高氯酸。 4.3盐酸溶液：盐酸+水=1+1(Vi+V）。 4.4 磷标准贮备液（50μg/mL） 取105℃干燥至恒重的磷酸二氢钾，置干燥器中，冷却后，精密称取0.2195g，溶解于水，定量移入 1000mL容量瓶中，加硝酸3mL，加水稀释至刻度，摇匀，即得。置聚乙烯瓶中4℃下可储存1个月。 4.5钒钼酸铵显色剂 称取偏钒酸铵1.25g，加水200mL加热溶解，冷却后再加人250mL硝酸（4.1），另称取钼酸铵 25g，加水400mL加热溶解，在冷却的条件下，将两种溶液混合，用水稀释至1000mL，避光保存，若生 成沉淀，则不能继续使用。 1 GB/T6437—2018 5仪器设备 5.1分析天平：感量0.0001g。 5.2紫外-可见分光光度计：带1cm比色血。 5.3高温炉：可控温度在士20℃。 5.4电热干燥箱：可控温度在土2℃。 5.5 5可调温电炉：1000W。 6试样的制备 按GB/T14699.1抽取有代表性的饲料样品，用四分法缩减取约200g，按照GB/T20195制备样 品，粉碎后过0.42mm孔径的分析筛，混勾，装人磨口瓶中，备用。 7试验步骤 7.1试样的前处理 7.1.1干灰化法 称取试样2g～5g，精确到1mg：置于中，在电炉上小心炭化，再放入高温炉，在550℃灼烧3h （或测粗灰分继续进行），取出冷却，加盐酸溶液（4.3)10mL和硝酸（4.1）数滴，小心煮沸约10min，冷却 后转人100mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，为试样溶液。 7.1.2湿法消解法 称取试样0.5g~5g，精确到1mg，置于凯氏烧瓶中，加入硝酸（4.1)30mL，小心加热煮沸至黄烟逸 尽，稍冷，加人高氯酸（4.2）10mL，继续加热至高氯酸冒白烟（不得蒸干），溶液基本无色，冷却，加水 30mL，加热煮沸，冷却后用水转人100mL容量瓶中并稀释至刻度，摇勾，为试样溶液 7.1.3盐酸溶解法（适用于微量元素预混料） 称取试样0.2g~1g，精确到1mg，置于100mL烧杯中，缓缓加人盐酸溶液（4.3)10mL，使其全部 溶解，冷却后转人100mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，为试样溶液。 7.2磷标准工作液的制备 准确移取磷标准贮备液（4.4)0mL、1mL、2mL、5mL、10mL、15mL于50mL容量瓶中（即相当 于含磷量为0ug、50ug、100μg、250μg、500μg、750μg），于各容量瓶中分别加人钒钼酸铵显色剂（4.5) 10mL，用水稀释至刻度，摇匀，常温下放置10min以上，以0mL磷标准溶液为参比，用1cm比色皿， 在400nm波长下用分光光度计测各溶液的吸光度。以磷含量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制工作 曲线。 7.3试样的测定 准确移取试样溶液1mL~10mL（含磷量50μg~750μg）于50mL容量瓶中，加人钒钼酸铵显色 剂（4.5）10mL，用水稀释至刻度，摇匀，常温下放置10min以上，用1cm比色皿，在400nm波长下用分 2 GB/T 6437—2018 标准工作曲线范围，应对试样溶液进行稀释。 8 3试验数据处理 8.1 结果计算 试样中磷的含量，以质量分数计，数值以%表示，结果按式（1）计算： mXV = 0m2 .....(1) 式中: w 试样中磷的含量； m1 通过工作曲线计算出试样溶液中磷的含量，单位为微克（ug）； V 试样溶液的总体积，单位为毫升（mL）； m 试样质量，单位为克（g）； 试样测定时移取试样溶液的体积，单位为毫升（mL）； 105 换算系数。 8.2 结果表示 每个试样称取两个平行样进行测定，以其算术平均值为测定结果，所得到的结果应表示至小数点后 两位。 9 精密度 在同一实验室，由同一操作者使用相同设备，按相同的测试方法，并在短时间内对同一饲料样品相 互独立进行测试获得的两次独立测试结果的绝对差值，当试样中总磷含量小于或等于0.5%时，不得大 于这两次测定值的算术平均值的10%；当试样中总磷含量大于0.5%时，不得大于这两次测定值的算术 平均值的3%。以大于这两次测定值的算术平均值的百分数的情况不超过5%为前提， GB/T 6437—2018 标准工作曲线范围，应对试样溶液进行稀释。 8 3试验数据处理 8.1 结果计算 试样中磷的含量，以质量分数计，数值以%表示，结果按式（1）计算： mXV = 0m2 .....(1) 式中: w 试样中磷的含量； m1 通过工作曲线计算出试样溶液中磷的含量，单位为微克（ug）； V 试样溶液的总体积，单位为毫升（mL）； m 试样质量，单位为克（g）； 试样测定时移取试样溶液的体积，单位为毫升（mL）； 105 换算系数。 8.2 结果表示 每个试样称取两个平行样进行测定，以其算术平均值为测定结果，所得到的结果应表示至小数点后 两位。 9 精密度 在同一实验室，由同一操作者使用相同设备，按相同的测试方法，并在短时间内对同一饲料样品相 互独立进行测试获得的两次独立测试结果的绝对差值，当试样中总磷含量小于或等于0.5%时，不得大 于这两次测定值的算术平均值的10%；当试样中总磷含量大于0.5%时，不得大于这两次测定值的算术 平均值的3%。以大于这两次测定值的算术平均值的百分数的情况不超过5%为前提， GB/T 6437—2018 标准工作曲线范围，应对试样溶液进行稀释。 8 3试验数据处理 8.1 结果计算 试样中磷的含量，以质量分数计，数值以%表示，结果按式（1）计算： mXV = 0m2 .....(1) 式中: w 试样中磷的含量； m1 通过工作曲线计算出试样溶液中磷的含量，单位为微克（ug）； V 试样溶液的总体积，单位为毫升（mL）； m 试样质量，单位为克（g）； 试样测定时移取试样溶液的体积，单位为毫升（mL）； 105 换算系数。 8.2 结果表示 每个试样称取两个平行样进行测定，以其算术平均值为测定结果，所得到的结果应表示至小数点后 两位。 9 精密度 在同一实验室，由同一操作者使用相同设备，按相同的测试方法，并在短时间内对同一饲料样品相 互独立进行测试获得的两次独立测试结果的绝对差值，当试样中总磷含量小于或等于0.5%时，不得大 于这两次测定值的算术平均值的10%；当试样中总磷含量大于0.5%时，不得大于这两次测定值的算术 平均值的3%。以大于这两次测定值的算术平均值的百分数的情况不超过5%为前提，