ICS 65.120 B 46 中华人民共和国国家标准 GB/T13085—2018 代替GB/T13085—2005 比色法 饲料中亚硝酸盐的测定 Determination of nitrite in feedsColorimetrymethod 2019-04-01实施 2018-09-17发布 国家市场监督管理总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T13085—2018 前言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草 本标准代替GB/T13085一2005《饲料中亚硝酸盐的测定 比色法》。 本标准与GB/T13085一2005相比，除编辑性修改外，主要技术变化如下： 修改了方法的检出限，增加了方法的定量限（见第1章，2005年版的第1章）； 修改了试液制备方法（见7.1，2005年版的7.1）； 修改了标准曲线的制备方法（见7.2，2005年版的7.2）； 一修改了吸光度测定方法（见7.32005年版的7.3）； 修改了精密度的要求（见第9章，2005年版的8.3）。 本标准由全国饲料工业标准化技术委员会（SAC/TC76）提出并归口。 本标准起草单位：华中农业大学。 本标准主要起草人：齐德生、张妮娅、贺琼玉、王峻、陶灿、朱洛毅。 本标准所代替标准历次版本发布情况为： GB/T13085—1991、GB/T13085—2005。 1 GB/T13085—2018 饲料中亚硝酸盐的测定 比色法 1范围 本标准规定了测定饲料中亚硝酸盐的比色法 本方法的检出限为0.70mg/kg，定量限为2.0mg/kg。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T14699.1饲料采样 GB/T20195动物饲料试样的制备 3原理 试样在弱碱性条件下除去蛋白质，在弱酸性条件下试样中的亚硝酸盐与对氨基苯磺酸反应，生成重 氮化合物，再与N-1-萘基乙二胺偶合形成紫红色化合物，在波长538nm条件下，进行比色测定 4试剂或材料 除非另有规定，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂。 4.1水：符合GB/T6682中规定的二级用水。 4.2稀盐酸溶液：取5mL盐酸，加入到100mL容量瓶中，用水定容，混匀。 4.3稀氨水：取5mL氨水，加人到100mL容量瓶中，用水定容，混匀。 4.4氯化铵缓冲液：量取500mL水于1000mL容量瓶中，加人20mL盐酸，混匀，加人50mL氨水， 用水定容至刻度。用稀盐酸（4.2）和稀氨水（4.3）调节pH至9.6～9.7。 4.5硫酸锌溶液：称取120g硫酸锌（ZnSO，·7HzO，用水溶解，并定容至1000mL，混匀。 4.6氢氧化钠溶液：称取20g氢氧化钠，用水溶解，并定容至1000mL，混匀 4.7乙酸溶液：量取600mL冰乙酸于1000ml容量瓶中，用水定容至刻度，混匀。 4.8对氨基苯磺酸溶液：称取5.0g对氨基苯磺酸，溶于700mL水和300mL冰乙酸中，混匀，置棕色 瓶保存，有效期为7d。 4.9N-1-萘基乙二胺溶液：称取0.1gN-1-茶基乙二胺，加乙酸溶液（4.7）溶解并定容至100mL，混匀 后置棕色瓶中，于4℃～10℃冰箱内保存，有效期为7d。 4.10显色剂：临用前将对氨基苯磺酸溶液（4.8）和N-1-萘基乙二胺溶液（4.9)等体积混合 加水溶解，转移至500mL容量瓶中，加100mL氯化铵缓冲液（4.4），加水稀释定容至刻度，混匀，于 2℃～8℃避光保存，有效期为6个月。或使用有证亚硝酸钠标准溶液进行配制 1 GB/T130852018 4.12亚硝酸钠标准工作溶液（5.0μg/mL）：准确移取1.00mL亚硝酸钠标准贮备溶液（4.11）于 100mL容量瓶中，加水稀释定容至刻度，混。临用现配。 5仪器设备 5.1分光光度计。 5.2水浴锅：控温范围为25℃~100℃，控温精度土1℃。 5.3分析天平：感量0.0001g。 6样品 依据GB/T14699.1采集样品，按照GB/T20195进行样品制备。粉碎，全部过1mm孔筛，混合均 匀，备用。 7试验步骤 7.1试液制备 平行做两份试验。称取约5g试样，精确到0.001g，置于200mL锥形瓶中，加70mL水和1.2mL 观察溶液是否产生白色沉淀。如不产生白色沉淀时，继续滴加氢氧化钠溶液（4.6），直至溶液产生沉淀 为止，混匀。置60℃水浴中加热10min，取出后冷却至室温，全部转移至200mL容量瓶中，加水至刻 度，混匀。放置30min，过滤，弃去初滤液约20mL，收集剩余滤液为试液，备用。 7.2亚硝酸盐标准曲线的制备 分别准确移取0mL、0.4mL、0.8mL、1.2mL、1.6mL、2.0mL亚硝酸钠标准工作溶液（4.12）于 25mL棕色容量瓶中（相当于0μg、2μg、4ug、6μg、8μg、10uμg亚硝酸钠），各加人4.5mL氯化铵缓冲 液（4.4），2.5mL乙酸溶液（4.7)后，立即加入5.0mL显色剂（4.10），用水定容至刻度，混匀，于避光处静 置25min。用1cm比色杯，以试剂空白为参比，于波长538nm处测定吸光度值。以吸光度为纵坐标， 标准系列中亚硝酸钠的含量为横坐标，绘制标准曲线。 7.3试液测定 分别移取两份10.0mL试液（7.1）于25mL容量瓶a和b中，在容量瓶a中加入4.5mL氯化铵缓 冲液（4.4）,2.5mL乙酸溶液（4.7）后用水定容至刻度，混匀；在容量瓶b中加入4.5mL氯化铵缓冲液 25min后，在波长538nm处，以容量瓶a溶液为试样参比，测定容量瓶b溶液的吸光度值，并与曲线进 8试验数据处理 样品中亚硝酸盐的含量以亚硝酸钠（NaNO,）的质量分数e计，数值以毫克每千克（mg/kg）表示， 按式(1)计算： _m²×V×1 000 =m .（1) mXV,X1000 2 GB/T13085—2018 式中： m1 试样质量，单位为克（g）； m2 测定用试液中亚硝酸盐（以亚硝酸钠计）的含量，单位为微克（μg）； Vi 样品处理后试液的总体积，单位为毫升（mL）； V2 测定用试液的体积，单位为毫升（mL）； 1000- 单位换算系数。 以两个平行样品测定结果的算术平均值报告结果，结果保留至小数点后一位。 9 精密度 在重复性条件下获得的两次独立测试结果与其算术平均值的绝对差值不大于该平均值的10%。 GB/T13085—2018 式中： m1 试样质量，单位为克（g）； m2 测定用试液中亚硝酸盐（以亚硝酸钠计）的含量，单位为微克（μg）； Vi 样品处理后试液的总体积，单位为毫升（mL）； V2 测定用试液的体积，单位为毫升（mL）； 1000- 单位换算系数。 以两个平行样品测定结果的算术平均值报告结果，结果保留至小数点后一位。 9 精密度 在重复性条件下获得的两次独立测试结果与其算术平均值的绝对差值不大于该平均值的10%。 GB/T13085—2018 式中： m1 试样质量，单位为克（g）； m2 测定用试液中亚硝酸盐（以亚硝酸钠计）的含量，单位为微克（μg）； Vi 样品处理后试液的总体积，单位为毫升（mL）； V2 测定用试液的体积，单位为毫升（mL）； 1000- 单位换算系数。 以两个平行样品测定结果的算术平均值报告结果，结果保留至小数点后一位。 9 精密度 在重复性条件下获得的两次独立测试结果与其算术平均值的绝对差值不大于该平均值的10%。